- ￥1400 - 6000
- EZBioscience
- EZB-RTProbe
- 美国
- 2026年10月14日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
500
- 英文名：
EZProbe One Step qRT-PCR Kit
- 供应商：
EZBioscience
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
500 Rxns×20μl/100 Rxns×20μl
| 规格： | 500 Rxns×20μl | 产品价格： | ￥6000.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 100 Rxns×20μl | 产品价格： | ￥1400.0 |
本试剂盒是专门以RNA为模板进行探针法定量PCR检测的试剂盒。本试剂盒有四管试剂：20× EZProbe One Step Enzyme Mix、2× EZProbe One Step Buffer、ROX1和ROX2，使逆转录和qPCR反应在同一个体系中完成，不需要额外的开管和移液，这大大提高了检测的通量、降低了检测的时间及污染的风险。本试剂盒的20×EZProbe One Step Enzyme Mix包含M-MLV突变体逆转录酶、热启动DNA聚合酶和RNase inhibitor，2× EZProbe One Step Buffer包含dNTPs、Oligo dT18引物、Random Hexamer 引物、高度优化的缓冲液体系，使之具备了更强的扩增效率、抗干扰能力，检测灵敏度可达到0.1pg总RNA或小于10 拷贝的靶基因。同时，本试剂盒中含有两管ROX参比染料，适用于任何仪器类型；使用时，只需根据仪器类型选用合适的ROX，再在配置的反应体系中加入模板RNA及引物，最后加水至指定体积即可，十分便于使用。使用本产品进行qPCR反应，可以在宽广的定量区域内得到良好的扩增曲线，对靶基因表达进行准确的定量检测，重复性好，可信度高。
| Component | EZB-RTProbe-S (100 Rxns×20μl) |
EZB-RTProbe (500 Rxns×20μl) |
| 20× EZProbe One Step Enzyme Mix | 100 µl | 500 µl |
| 2× EZProbe One Step Buffer | 1 ml | 5 ml |
| 50× ROX Reference Dye 1 | 44 µl | 220 µl |
| 50× ROX Reference Dye 2 | 44 µl | 220 µl |
三．保存条件
本试剂盒所有组分建议置于-20°C保存。
四．试剂盒特点
1、灵敏度高：以RNA为模板进行探针法定量PCR检测的试剂盒。检测灵敏度可达到0.1 pg总RNA或小于10拷贝的靶基因；
2、适用广：本试剂盒中含有两管ROX参比染料，适用于任何仪器类型；使用时，只需根据仪器类型选用合适的ROX；
3、操作简单：在配制的反应体系中加入模板RNA、探针及引物，最后加水至指定体积即可，十分便于使用。
五、注意事项
1、20× EZProbe One Step Enzyme Mix 试剂含有高浓度的甘油，使用前请充分混匀后再短暂离心至管底；
2、反应液的配制请使用 RNase-free或者灭过菌的枪头、EP管等，尽量避免污染；
3、使用前，将 20× EZProbe One Step Enzyme Mix 和 2× EZProbe One Step Buffer 试剂从-20°C冰箱中取出，冰上放置10分钟或用手紧握试剂管使之充分融化，上下颠倒10次充分混匀（非常重要），然后使用离心机短暂离心至管底，放在冰上备用。
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文献和实验了我的扩增曲线呢？ 其实，这种现象并不是偶发的，有很多原因可能导致，并且有个专属名称「Hook Effect」，翻译过来叫「鱼钩效应」。「鱼钩效应」指在荧光定量 PCR 过程中，DNA 扩增到指数增长期后出现的一种荧光信号不能保持稳定（或者上升）而出现下降的现象 [1]。 导致扩增曲线出现这一现象的因素比较复杂，这里我们分别从嵌入性染料法与探针法两种定量方式的角度为大家解释： 嵌入性染料法： 嵌入性染料法（例如 SYBR Green I）产生「鱼钩效应」主要是由于模板序列混杂，在 PCR
扩增曲线的分析攻略。 1、确认软件设置是否正确 对照试剂盒说明书，检查时间、温度、循环数、荧光采集等是否设置正确。有一个比较容易忽略的设置问题是，需要看下所选用的试剂中是否含有 ROX 来作为参比荧光染料。Applied Biosystems™ 系列荧光定量 PCR 仪器可以用 ROX 来作为参比荧光染料，用以校正仪器系统以外的物理误差，比如均一化校正由于移液误差或者蒸发导致的批内体积误差等。目前市面上有的的荧光定量 PCR 预混液是不含有 ROX 的，当用此类试剂的时候，应该将 ROX 参比
」和「扩增区」分割开 PCR 体系配置和 PCR 扩增实验。如果不具备这样的条件，首先要避免荧光定量 PCR 实验结束之后开盖，以防扩增产物形成气溶胶对后续实验造成污染。少量意外开盖不能避免时，可以使用含有 UNG 酶（uracil-N-glycoslyase, 尿嘧啶 DNA 糖基化酶）的扩增预混液。如果在 PCR 反应中以 dUTP 代替 dTTP 参入到 PCR 产物中，形成了含有 dUTP 的扩增产物，UNG 酶能选择性断裂单链和双链 DNA 中 U 碱基的糖苷键， 降解 PCR 扩增
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