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文献和实验3处理后,用Micromass的专用软件MasSeq直接推倒出肽段序列。Nanoflow probe进样毛细管电压为3000v。所有测定均在正离子方式下进行,用Glu-fib(sigma)的串联质谱碎片校正,质量准确度±0.2Da。中性丢失扫描:设定扫描范围400-2000,扫描方式为中性丢失扫描,寻找中性丢失49的双电荷离子。基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱仪为Bruker公司的Autoflex,将样品溶于0.1%TFA中,取1μL与饱和CCA基质上清液混合,取1μL点在Scorce384靶
离心数秒,以移液器吸干残留乙醇; (10)白色沉淀置于37°C干燥箱中,使残存的70%乙醇全部挥发干净,这个过程中要经常拿出观察,防止过度烘干,不利于后面溶解; (11)待白色沉淀变透明后,向2mLEP管中加入0.9mLTE缓冲液(pH8.0),放置于65℃恒温箱中,期间轻微弹匀,使DNA充分溶解; (12)DNA完全溶解后,加入5μL RNase(0.1mg/mL),置于37°C干燥箱中30min,消化RNA,取出3μL,以1%琼脂糖胶检测是否有RNA残留; (13)待RNA消化完成
剂 : 0.48%柠檬酸,1.32%柠檬酸钠,1.47%葡萄糖3.方法1)样品的处理和裂解(1)将100μl鱼血用PBS稀释至1ml(2)加入1倍体积冰冷的Buffer C1,3倍体积(3ml)的ddH2O 。(3)翻转数次至悬冷液成半透明(4)冰浴10min。(5)4℃,1300g离心15min,弃上清液。(6)加入250μl冰冷的Buffer C1,750μl冰冷的ddH2O。(7)轻弹,溶解沉淀。(8)4℃,1300g离心15min,弃上清液(如沉淀不是白色,重复洗涤步骤)。(9)加入1ml
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