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文献和实验操作1、将灭菌后的罐体放回原位,连接冷凝水管路,通入冷凝水,连接通气管路,调整通气量至3~5L/min。2、将温度电极、pH电极、溶氧电极与控制器连接。3、补料管连接:打开补料蠕动泵防护盖,搬开进出口处的白色管夹,将硅胶管嵌入入口处的管夹并夹紧,用手转动泵头,将硅胶管沿凹槽安装直至出口处,开手动开关约十秒后夹紧出口处管夹,关手动开关;将酒精棉球放在罐盖补料口内,将针头插入并穿透密封盖;打开蠕动泵手动开关,使输液管中充满料液,置于自动状态。4、酸碱液、消泡剂操作同补料操作。5、接种:旋松接种口
液裂解细胞,用移液器适当吹打使细胞脱落,大瓶贴壁细胞可以先用胰酶洗脱下来后再裂解,裂解方法仿照悬浮细胞处理。 B、 悬浮细胞的处理:先将悬浮细胞置于 EP 管中 3000 rpm 离心 5 min 去掉上清培养基,每 20 μL 体系细胞加 100 μL 裂解液反复吹打至细胞完全破碎。 处理好的样品 12000 rpm 离心 5 min,取上清即为提取的蛋白。置于 4 ℃ 可保存一周,-20℃ 可保存约 2 个月,-80 ℃ 可保存半年。 蛋白浓度的测定:酶标板,酶标仪、离心机、1 mg/mL
。 3. DNA沉淀呈棕色,难以酶切 植物材料含有大量酚类化合物,与DNA共价结合,使DNA呈棕色,并抑制DNA的酶解反应。为防止此情况出现,可在加入2 ×CTAB的同时加入2-5%的巯基乙醇,或者加入亚精胺(100μl DNA加5μl 0.1mol/L的亚精胺)。 4.DNA中含有多糖或盐类 将DNA用100%乙醇或异丙醇沉淀出来,离心,沉淀用70%乙醇清洗两次或更多次,吹干后重溶于TE中。(注意乙醇一定要吹干, 否则电泳点样时, 样品上漂) 5.DNA已降解电泳条带呈弥散状 样品降解可能有两种
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