- ￥600
- 联迈生物
- LM-27046S
- 上海
- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
18
- 英文名：
ClAP
- CAS号：
9001-78-9
- 保质期：
2年
- 供应商：
上海联迈生物工程有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
1mg
- 英文名：
- ClAP
- 别名：
- 碱性磷酸酯
- CAS号：
- 9001-78-9
- MDL：
- MFCD00131849
- 来源：小牛肠
- 比活力Specific activity：3000～6000u/mg protein
- 性状(以下信息仅供参考)：悬浮液。
- 介绍：碱性磷酸酶能催化除去DNA、RNA、三磷酸核糖核苷和三磷酸脱氧核糖核苷的5′磷酸基团。由于CIP处理后的DNA片段缺少连接酶所要求的5′磷酸末端，因此它们不能进行自连接(1)。这个特性可以在克隆时降低载体DNA的背景
- 储存条件： 2-8℃
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文献和实验固定，用X-gal显色。每个蓝染的细胞代表一个载体转导单位(T.U.)。 载体基因组拷贝数用点印迹杂交分析来确定，如前所述方法测定A260(Fisher et al.,1996)。对于6孔盘的小规模包装实验，制备的原始载体用DNase I在37°C处理30分钟。DNase 在75°C灭活，蛋白质用50mM Tris 1mM EDTA 0.1%SDS 0.5mg/ml蛋白酶K在37°C消化12小时。对于CsCl2纯化的载体，使用相同的步骤，但不用DNase步骤。载体DNA煮沸5分钟，用Bio-Dot装置(Bio
消化、计数和稀释细胞，稀释到常规细胞传代的浓度。 2）分散细胞悬液到多孔培养板中，或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内，把选择抗生素加入到每一个孔中。例如，两性霉素B推荐下列浓度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0，8.0 mg/ml。 3）每天观测细胞毒性指标，如脱落，出现空泡，汇合度下降和变圆。 4）确定抗生素毒性水平后，使用低于毒性浓度2～3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2～3代。 5）在无抗生素的培养基中培养细胞一代。
、离心后去上phenyl－sephorase柱。但发现活性大部分还在沉淀中。测了一下蛋白浓度是20mg/ml。是不是浓度太高啊？ 30％－60％硫酸铵沉淀可能对你的目的蛋白来讲，太粗略了，如你所言，目的蛋白可能在沉淀中，可否分级沉淀，３０％－５０％，５０％－６０％，再测一下活性可能就分开了，20mg/ml的蛋白浓度对于层析是有点高，洗脱液浓度变化或PH的改变都会使蛋白有损失，最好不要超过１０mg/ml。 59) 我的蛋白是用pGEX-4T载体在BL21中表达的，表达量很高，形成包涵
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