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13620
Amplite比色法鞘磷脂酶检测试剂盒,蓝色荧光
Amplite® Colorimetric Sphingomyelinase Assay Kit *Blue Color
4℃
Amplite® Colorimetric Sphingomyelinase Assay Kit *Blue Color
200T
mplite 比色法鞘磷脂酶检测试剂盒 蓝色荧光是美国AAT Bioquest生产的用于检测鞘磷脂的试剂盒,鞘磷脂酶(SMase)是一种酶,负责将鞘磷脂(SM)切割成磷酸胆碱和神经酰胺。细胞中SMase的在细胞反应中起重要作用。已经基于它们的阳离子依赖性和佳作用pH鉴定了五种类型的鞘磷脂酶(SMase)。它们是溶酶体酸性SMase,分泌锌依赖性酸性SMase,镁依赖性中性SMase,镁依赖性中性SMase和碱性SMase。在这五种类型中,溶酶体酸性SMase和镁依赖性中性SMase被认为是细胞对应激反应中产生神经酰胺的主要候选物。
我们的Amplite 比色鞘磷脂酶检测试剂盒为检测中性SMase活性或筛选其抑制剂提供了一种灵敏的方法。 该试剂盒使用我们专有的Amplite Blue作为比色探针,间接定量鞘磷脂酶(SMase)水解鞘磷脂(SM)产生的磷酸胆碱。它可用于测量血液,细胞提取物或其他溶液中的SMase活性。655nm处的光吸收与磷酸胆碱的形成成比例,因此与SMase活性成比例。该试剂盒是一种优化的“混合和读数”分析,与HTS液体处理仪器兼容。
适用仪器
光吸收酶标仪 | |
吸收: | 655nm |
推荐孔板: | 透明底板 |
96孔板测定示例
概述
准备鞘磷脂工作溶液(50μL)
添加SMase标准品和/或SMase测试样品(50μL)
在37°C孵育1-2小时
加入鞘磷脂酶工作溶液(50μL)
在室温下孵育持续1-2小时
监测655nm处的吸光度
注意:在开始实验之前,在室温下解冻每个试剂盒组分的一个小瓶(或瓶)。
溶液配制
1.储备溶液配制
1.1鞘磷脂酰胆碱酶标准储备溶液(10 U/mL):
将含有0.1%BSA的20µL PBS加入鞘磷脂酶标准品(组分F)瓶中,制成10units/mL鞘磷脂酶的标准储备溶液。
1.2Amplite™ UltraBlue储备溶液(200X):
向Amplite™UltraBlue ( C组分)瓶中加入100 μ L DMSO ( G组分),制成200 × Amplite™UltraBlue储备液。注:Amplite™Ultra Blue在硫醇(如DTT和2 -巯基乙醇等)存在下不稳定。反应中DTT或2 -巯基乙醇的终浓度应低于10 µ M,Amplite™Ultra Blue在高pH ( > 8.5 )下也不稳定。反应应在p H 7 ~ 8之间进行。
2.标准溶液配制
将1 µ L的10units/ mL的鞘磷脂酶标准储备液加入1000 µ L的检测缓冲液( E组分)中,生成10 mU / mL的鞘磷脂酶标准品。取10 m U / m L鞘磷脂酶标准品500 µ L,进行1∶2系列稀释,得到系列稀释的鞘磷脂酶标准品( SMase7 - SMase1)。注:稀释后的鞘磷脂酶标准储备液不稳定,应在4小时内使用。为方便起见,请使用串行稀释计算器:https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/13620
3.工作溶液配制
3.1.准备鞘磷脂工作液:
将50μL鞘磷脂(组分B)加入5mL SMase反应缓冲液(组分D)中,并充分混合。
注意:应及时使用鞘磷脂工作液。
3.2.鞘磷脂酰胆碱酶工作溶液:
在酶混合液(组分A )瓶中加入5 m L Assay Buffer (组分E ),混匀。在酶标混合液瓶中加入50 μ L 200X Amplite™Ultra Blue储备液,开始测定。注意:应及时使用鞘磷脂酶工作液,注意避光;较长时间的储存容易造成较高的检测背景。混合物的浑浊度正常;不会对检测性能产生干扰。
样本实验方案
表1.将鞘磷脂酶标准品和待测样品置于白色壁/透明底96孔微孔板中。Smase =鞘磷脂酶标准品( SMase1 ~ SMase7 , 0.078 ~ 5 mU / m L),Bl =空白对照,ts =待测样品。
BL | BL | TS | TS |
SMase1 | SMase1 | ... | ... |
SMase2 | SMase2 | ... | ... |
SMase3 | SMase3 | ||
SMase4 | SMase4 | ||
SMase5 | SMase5 | ||
SMase6 | SMase6 | ||
SMase7 | SMase7 |
表2 .每孔试剂组成。
孔 | 体积 | 试剂 |
SMase1-SMase7 | 50μL | 系列稀释液( 0.078 ~ 5m U / m L) |
BL | 50μL | 缓冲液 |
TS | 50μL | 测试样品 |
1.按照表1和表2提供的布局制备鞘磷脂酶标准品( SMase )、空白对照( BL )和待测样品( TS )。对于384孔板,每孔使用25 µ L的试剂,而不是50 µ L。
2.向鞘磷脂酶标准品、空白对照、供试品各孔中加入鞘磷脂工作液50 µ L,使总测定体积为100 µ L /孔。对于384孔板,每孔加入25 µ L鞘磷脂工作液,总体积为50 µ L /孔。
3.反应混合物在37℃孵育1 - 2小时。
4.向鞘磷脂酶标准品、空白对照、待测样品各孔中加入50 µ L鞘磷脂酶工作液,使总测定体积为150 µ L /孔。对于384孔板,每孔加入25 µ L鞘磷脂酶测定工作液,总体积为75 µ L /孔。
5.反应混合物在室温下孵育1 - 2小时。
6.用酶标仪在655 nm处测定吸光度值。
13620 | Amplite 比色法鞘磷脂酶检测试剂盒 蓝色荧光 | 200 Tests | 2823 |
13621 | Amplite 荧光法鞘磷脂酶检测试剂盒 红色荧光 | 200 Tests | 2823 |
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试剂应用文献
参考文献