A10胚胎大鼠主动脉平滑肌细胞丨逸漠(immocell)

A10胚胎大鼠主动脉平滑肌细胞
一、细胞特性

1)来源：主动脉平滑肌

2)形态：三角形，梭形

3)含量：>1x106 个/mL

4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5)规格：T75瓶或者1mL冻存管包装

二、运输和保存

(1)使用含有优质胎牛血清的2ml冻存管发送存活细胞。

(2)收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至10cm培养皿或者T75培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供科研使用。

三、细胞培养步骤

1.培养基及培养冻存条件准备：

1)准备DMEM/F12培养基(DMEM/F12:GIBCO,货号12400024)，90%;小牛血清，10%。

2)培养条件： 气相：空气，95%;二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3)冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

2.细胞处理：

1)复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2)细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

a.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

c.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

d.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3)细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。