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- 仕诺达
- 详见说明书
- SND-Pl019
- 安徽
- 2026年01月01日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
仕诺达
- 库存：
999
- 样本：
组织、细胞及相关液体样本
- 标记物：
植物蛋白酪氨酸磷酸酶1B
- 适应物种：
植物
- 应用：
高校，中科院研究所，研发单位
- 检测方法：
ELISA
- 检测范围：
详见说明书
- 规格：
48T/96T
植物蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B）ELISA试剂盒
■此价格为产品目录价，针对客户购买情况公司有不同的优惠折扣，欢迎咨询订购~
■郑重申明：本公司销售所有产品均为实物拍摄，如产品出现质量问题，本公司包一切售后！！！
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l 本试剂盒用于体外定量检测组织、细胞及相关液体样本中植物蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B）的含量。
l 有效期：6个月
l 保存条件：2-8℃
l 本试剂盒仅供科研使用，不得用于临床诊断
实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被植物蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
需要而未提供的试剂和器材
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
4. 蒸馏水或去离子水
试剂盒组成
| 名称 | 96孔配置 | 48孔配置 | 备注 |
| 微孔酶标板 | 8孔×12条 | 8孔×6条 | 无 |
| 标准品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 无 |
| 样本稀释液 | 6mL | 3mL | 无 |
| 检测抗体-HRP | 10mL | 5mL | 无 |
| 20×洗涤缓冲液 | 25mL | 15mL | 按说明书进行稀释 |
| 底物A | 6mL | 3mL | 无 |
| 底物B | 6mL | 3mL | 无 |
| 终止液 | 6mL | 3mL | 无 |
| 封板膜 | 2张 | 2张 | 无 |
| 说明书 | 1份 | 1份 | 无 |
| 自封袋 | 1个 | 1个 | 无 |
1. 标准品浓度依次为：1600、800、400、200、100、50 pg/mL
2. 经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。
注意事项
1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6. 在储存和温育时避免强光直接照射。
7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
9. 不能使用过期产品。
10. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。
试剂准备
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
操作步骤
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3. 样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
实验结果计算
以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。
试剂盒性能
1. 检测范围：0.625 ng/mL – 20 ng/mL。
2. 灵敏度：最低检测浓度小于0.1 ng/mL。
3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。
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文献和实验5% 脱脂奶粉，0.15 M NaClB：5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：0.2 mg/mL，溶于 5% 脱脂奶粉，0.15 M NaClFig.1脱脂奶粉及 NaCl 浓度对实验结果的影响抗体：Human PTP1B Antibody (Catalog # AF1366)蛋白分离：人 HeLa 细胞 (Lane 1)，MCF-7 (Lane 2) 和 TF-1 (Lane 3)(Fig.2)A. 5% 脱脂奶粉封闭，一抗浓度：1.0 mg/mL，溶于 2% 脱脂奶粉和 0.15 M NaClB
【共享】Cancer cell：VEGF能抑制肿瘤细胞浸润和间质转型
控肿瘤细胞的侵袭，通过促进蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B）募集到间质上皮转化MET/VEGFR2杂合物中，从而抑制肝细胞生长因子依赖的MET磷酸化和肿瘤细胞迁移。 因此，血管内皮生长因子的封闭抑制反而恢复和增加GBM细胞中MET的活性。因此研究人员认为在阻断血管内皮生长因子时，同时抑制小鼠模型中肿瘤细胞的间质转型和侵袭将会大大提高导患者的生存时间 VEGF Inhibits Tumor Cell Invasion and Mesenchymal Transition
酶活性和抗体活性的测定可应用ELISA法、免疫 扩散、DAB-H2O2显色反应测定酶结合物的酶活性，抗体活性及效价、特异性。 (8)HRP抗体结合物的保存：加入等量甘油后，小量分装-20℃存放，防止反复冻融;或加入等量60%甘油4℃保存;不宜加NaN3或酚防腐，否则会影响酶活性。必要时冻干保存，以BSA或脱脂牛奶作保护剂。 程序二： (1)将5mg HRP 溶于0.3mol/L PH8.1 NaHCO3溶液中，加入1%二硝基氟苯无水乙醇溶液0.1ml
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