DIC专用培养皿盖

短时间获得更长活细胞成像的 4 个技巧

培养皿推测这些值。 因此，务必通过检查图像对比度的方式对校正环进行精确调整，尤其是在使用塑料微孔板或培养皿时更要如此。 通常情况下，环校正必须要在现场进行调整。对于诸如使用多光子显微镜进行深层观察等需要主动调整环校正的实验，这可能意味着需要在实验室中花费更多的时间，但是可以选择使用电动校正环自动执行这些调整。   图 2.物镜上的校正环带有可指示盖玻片厚度的指示器   4.使用专用聚焦模块让样品保持聚焦 可是如果发生 Z 漂移怎么办？即使完成上述所有操作，图像也可能无法始终保持对焦。毕竟，很多

技术原理与方法｜渐变对比度方法简介

的数值孔径大于其他方法，因此不易出现因透过有水滴的皮氏培养皿盖成像而产生的问题。该特性还可防止在调制对比方法中采用屏蔽元件而导致的分辨率下降。另一个实用优点是，无需专用物镜，也无需在物镜转换时切换元件，从而可以更快、更方便地进行观察。 表 1. 观察方法的比较 （3）渐变对比方法的光学配置 APX100 成像系统的光学配置如图 3 所示。光通过光路照射到样品上并在成像面上成像。 渐变 ND 滤光片放置在与物镜的光瞳位置共轭的位置。该滤光片仅在系统设置为采用渐变对比方法时才会进入光路。聚光

利用更短的实验时间，获得更长活细胞成像时长的 4 个技巧

是开始活细胞实验前尽可能精确设置焦点和校正环。实际操作过程中研究人员往往只会细心调整焦点，而忽略了校正环。然而，校正环能够显著改善图像的质量，在进行深层组织观察或使用高数值孔径物镜时尤为重要。 校正环的理想位置取决于诸如样品折射率、观察平面深度和盖玻片厚度等许多因素。即便大多数盖玻片和玻璃底培养皿的厚度只有 170μm（＃1.5），其仍然会导致波动。特别要注意的是，我们不能以塑料培养皿推测这些值。因此，务必通过检查图像对比度的方式对校正环进行精确调整，尤其是在使用塑料微孔板或培养皿时更要如此。 通常