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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
42
- 英文名:
Enhanced Endogenous Peroxidase Blocking Buffer
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海西格
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
100mL
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括:
①细胞核、染色体以及基因表达的研究;
②生物膜与细胞器的研究;
③细胞骨架体系的研究;
④细胞增殖及其调控;
⑤细胞分化及其调控;本产品仅供科研
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡);
⑦细胞的起源与进化;⑧细胞工程.
细胞生物学研究的常用技术有哪些:
1.显微技术:包括显微观察,显微操作.
2细胞组分分析技术:离心分离技术,生物大分子定位技术,定量细胞化学分析技术.
3.细胞工程:细胞培养。
产品名称:内源性过氧化物酶封闭液(增强型)
英文名称:Enhanced Endogenous Peroxidase Blocking Buffer
产品规格:100mL
发货周期:1~3天
本制品主要用于免疫组化(IHC)、免疫细胞化学染色(ICC)以及原位杂交(ISH)时组织或细胞内源性过氧化物酶的封闭。
内源性过氧化物酶广泛存在于一些细胞和组织中,包括血红细胞、肾脏和肝脏组织等。从而导致利用过氧化物酶的方法进行样品检测时会出现较高的背景,甚至出现假阳性结果。因此,细胞或组织样品等在染色前宜使用适当的过氧化物酶封闭液进行封闭,以消除内源性过氧化物酶的干扰。
我公司的内源性过氧化物酶强力封闭液的组分经过反复测试和优化,具有超强的过氧化物酶封闭效果。普通的过氧化氢溶液只能部分抑制过氧化物酶的活性,我公司的内源性过氧化物酶封闭液(YTB1101)的效果要显著优于常规的过氧化氢溶液,而本产品则可以几乎完全抑制过氧化物酶的活性,从而能更加充分地降低非特异性的背景染色
本产品能强力封闭过氧化物酶从而有效降低染色背景,但不会削弱特异性的信号,有时甚至能增强特异性的信号。本制品使用便捷,可以直接使用,无须配制或稀释。一个包装的本产品按照每个样品需要使用100微升封闭液计算,共可以用于1000个样品。
保存条件:4℃保存,至少一年有效。
注意事项:
·本产品已经测试了多种抗体的免疫染色效果,都发现终的染色效果和常规方法相当或显著改善。对于特定抗原的检测,万一使用本产品后出现染色效果欠佳的意外情况,可以尝试使用的内源性过氧化物酶封闭液(YTB1101)。
·对于使用过氧化物酶检测系统有困难的一些特殊情况,可以考虑尝试使用碱性磷酸酶检测系统。
·本产品不含剧毒的甲醇,但还是对人体有刺激性,请注意适当防护。
·本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
·为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
具有显著特点:
灵敏度高,数据可靠,重现性好
操作简便,省时省力
水溶性,不需要换液,尤其适合于悬浮细胞
无需放射性同位素和有机溶剂,对细胞毒性低
为1瓶溶液,毋需预制,即开即用
适合于高通量药物筛选
细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。本产品仅供科研
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
内源性过氧化物酶封闭液(增强型)操作步骤:
1、用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液;
2、用0.5%胰蛋白酶:0.2%EDTA=1:1混合液来消化培养的贴壁细胞;
3、再加入适量Hanks液制成细胞悬液;
4、将待染色细胞稀释至所需浓度(方法及浓度范围与细胞计数相同);
5、每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴,室温下染3—5min;
6、染色过的细胞材料,取一滴细胞悬液置玻片上,加盖玻片后放高倍镜下观察;
7、死亡的细胞着浅蓝色并膨大,无光泽。活细胞不着色并保持正常形态,有光泽;
8、计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目;
9、统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活率
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文献和实验不完全:使用正常山羊血清或 1%~5% BSA 封闭 1h。 (5)离子相互作用造成的背景:降低抗体稀释液的离子强度。 (6)切片或细胞过于干燥或孵育温度过高:实验过程中请保持切片处于湿润状态,一抗孵育时尽量使用 4℃ 过夜孵育。 (7)内源性过氧化物酶残余:适度延长内源性过氧化物酶阻断剂阻断时间。 (8)样本于缓冲液或抗原修复液中浸泡太久:样本在溶液中浸泡时间不要超过 24h。 Q4:为什么会出现非特异性染色,如何避免? (1)抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加非特异性染色:由于本试剂盒使用
、关键试剂操作条件 1. DAB 显色反应大约需要30s-5 min,要控制好反应时间,勿使背景颜色过深。具体的可能还是得根据切片组织来源和切片厚度、试剂盒说明摸索条件。 2. 蛋白酶K工作液处理时间、温度须在范围内摸索,温度过高,时间过长,易造成脱片且可能破坏核酸结构,出现假阳性。 3. 阳性样本的DNase 1处理一般建议室温,10 min 即可。 五、如何减弱非特异性染色 肝脏或肾脏,因富含内源性过氧化物酶,需要增加过氧化氢浓度和延长孵育时间。其他还可以加强灭活、缩短 DAB 孵育
啊!」「IHC,啥来头?」李湿兄扶了扶眼镜, 「IHC 可不是啥新鲜事儿,早在上个世纪七十年代,便已有人使用这项技术。近年来,随着『无图无真相,王道即真理』观念的强化,越来越多的研究使用这项古老且神秘的技术检测组织标本中特定蛋白的表达和分布,使科学假想与体内环境有机结合,让科学论文的质量得以升华。」以下是烧脑宝典,欲练此功,无需自宫IHC 简而言之,统共分成七步:脱蜡/复水,抗原修复,淬灭(去除内源性过氧化物酶),封闭,抗体孵育及 DAB 显色。前三步形似泡澡堂,后三步形似 Western blot。泡澡
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