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免疫组化SP法检测试剂盒(小鼠/兔IgG)

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  • 西格
  • XG-X10909
  • 进口、国产
  • 2025年07月09日
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    • 英文名

      SP Kit(Broad Spectrum)

    • 保质期

      详见说明书

    • 供应商

      上海西格

    • 保存条件

      低温冷藏

    • 规格

      3ml|6ml|18ml|110ml

    免疫组化SP法检测试剂盒(小鼠/IgG)细胞生物学研究有以下几个方面:
    细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括:
    ①细胞核、染色体以及基因表达的研究;
    ②生物膜与细胞器的研究;
    ③细胞骨架体系的研究;
    ④细胞增殖及其调控;
    ⑤细胞分化及其调控;本产品仅供科研
    ⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡);
    ⑦细胞的起源与进化;⑧细胞工程.
    细胞生物学研究的常用技术有哪些:
    1.显微技术:包括显微观察,显微操作.
    2细胞组分分析技术:离心分离技术,生物大分子定位技术,定量细胞化学分析技术.
    3.细胞工程:细胞培养。
    产品名称:
    免疫组化SP法检测试剂盒(小鼠/IgG)
    英文名称:SP Kit(Broad Spectrum)

    产品规格:3ml|6ml|18ml|110ml
    发货周期:13
    本试剂盒适合于一抗为小鼠/IgG的免疫组化实验DAB显色。SP法检测试剂盒是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质,同亲和素一样,对生物素有极高的亲和力,亲和素是一个碱性蛋白质(PI=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,对组织和细胞的非特异吸附很低,因此基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。
    保存:如果长时间不使用,请将所有试剂存放于-20℃,如经常使用,可将封闭液,3%H2O220×DAB显色液B存放于2-8℃以方便使用。
    操作步骤(以石蜡切片为例):
    1.切片常规脱蜡至水(三次二甲苯,三次乙醇)
    23%H2O2室温处理5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
    3.可选步聚:
      a、热修复抗原,将切片浸入0.01M柠檬酸钠缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔510分钟后,反复12次。冷却后PBSpH7.2-7.6)洗涤12次。
      b、酶消化,滴加消化液,3710分钟,PBSpH7.2-7.4)洗涤23次。
      c、跳过此步,直接进入下一步。
    4.滴加封闭液,室温20分钟。甩去多余液体,免洗。
    5.用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周),也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗37℃孵育1小时左右或202小时左右,也可4℃过夜。PBSpH7.2-7.4)洗涤3次,每次2分钟。(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。)
    6.根据用量,用稀释液将生物素-羊抗小鼠/IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl生物素-羊抗小鼠/IgG浓缩液混匀,此工作液4℃可保存一周)。滴加生物素-羊抗小鼠/IgG工作液,20-37℃孵育30分钟。PBSpH7.2-7.4)洗涤3次,每次2分钟。
    7.根据使用量,用稀释液将链酶亲和素-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl链酶亲和素-POD浓缩液混匀,此工作液4℃可保存一周)。滴加链酶亲和素-POD工作液,20-37℃,30分钟。PBSpH7.2-7.4)洗涤4次,每次5分钟。
    8DAB显色:根据用量,用PBSpH7.2-7.4)配制,按1mlPBS加入50μl 20×DAB显色液A,加入50μl 20×DAB显色液B。充分混匀后滴加到切片上。室温显色,镜下控制反应时间,一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
    9.苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。
    对于细胞爬片,固定后,PBS漂洗两次,再用0.5% Triton X-100室温孵育20分钟,PBS漂洗两次,3%H2O2处理15分钟;PBS漂洗两次,接上述第4步。
    对于冰冻切片,固定后,PBS漂洗两次,接上述第二步。
    注意事项:
    如果染色背景过高,在SP反应之后,DAB显色之前,用加有0.01-0.02% TWEEN-20PBSTpH7.2-7.4)洗涤切片4次,PBS2次,然后DAB显色。
    具有显著特点:
    灵敏度高,数据可靠,重现性好
    操作简便,省时省力
    水溶性,不需要换液,尤其适合于悬浮细胞
    无需放射性同位素和有机溶剂,对细胞毒性低
    为1瓶溶液,毋需预制,即开即用
    适合于高通量药物筛选
    细胞培养的优点:
    1.研究的对象是活细胞
    在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
    2.研究条件可以人为控制
    pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。本产品仅供科研
    3.研究的样本可以达到比较均一性
    通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
    4.研究内容便于观察、检测和记录
    采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。

    免疫组化SP法检测试剂盒(小鼠/IgG)操作步骤:
    1、用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液;
    2、用0.5%胰蛋白酶:0.2%EDTA=1:1混合液来消化培养的贴壁细胞;
    3、再加入适量Hanks液制成细胞悬液;
    4、将待染色细胞稀释至所需浓度(方法及浓度范围与细胞计数相同);
    5、每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴,室温下染3—5min;
    6、染色过的细胞材料,取一滴细胞悬液置玻片上,加盖玻片后放高倍镜下观察;
    7、死亡的细胞着浅蓝色并膨大,无光泽。活细胞不着色并保持正常形态,有光泽;
    8、计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目;
    9、统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活率

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