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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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24
- 英文名:
SP Kit(Broad Spectrum)
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海西格
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
3ml|6ml|18ml|110ml
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括:
①细胞核、染色体以及基因表达的研究;
②生物膜与细胞器的研究;
③细胞骨架体系的研究;
④细胞增殖及其调控;
⑤细胞分化及其调控;本产品仅供科研
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡);
⑦细胞的起源与进化;⑧细胞工程.
细胞生物学研究的常用技术有哪些:
1.显微技术:包括显微观察,显微操作.
2细胞组分分析技术:离心分离技术,生物大分子定位技术,定量细胞化学分析技术.
3.细胞工程:细胞培养。
产品名称:免疫组化SP法检测试剂盒(小鼠/兔IgG)
英文名称:SP Kit(Broad Spectrum)
产品规格:3ml|6ml|18ml|110ml
发货周期:1~3天
本试剂盒适合于一抗为小鼠/兔IgG的免疫组化实验DAB显色。SP法检测试剂盒是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质,同亲和素一样,对生物素有极高的亲和力,亲和素是一个碱性蛋白质(PI=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,对组织和细胞的非特异吸附很低,因此基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。
保存:如果长时间不使用,请将所有试剂存放于-20℃,如经常使用,可将封闭液,3%H2O2和20×DAB显色液B存放于2-8℃以方便使用。
操作步骤(以石蜡切片为例):
1.切片常规脱蜡至水(三次二甲苯,三次乙醇)。
2.3%H2O2室温处理5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
3.可选步聚:
a、热修复抗原,将切片浸入0.01M柠檬酸钠缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔5~10分钟后,反复1~2次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1~2次。
b、酶消化,滴加消化液,37℃10分钟,PBS(pH7.2-7.4)洗涤2~3次。
c、跳过此步,直接进入下一步。
4.滴加封闭液,室温20分钟。甩去多余液体,免洗。
5.用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周),也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗37℃孵育1小时左右或20℃2小时左右,也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次,每次2分钟。(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。)
6.根据用量,用稀释液将生物素-羊抗小鼠/兔IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl生物素-羊抗小鼠/兔IgG浓缩液混匀,此工作液4℃可保存一周)。滴加生物素-羊抗小鼠/兔IgG工作液,20-37℃孵育30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次,每次2分钟。
7.根据使用量,用稀释液将链酶亲和素-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl链酶亲和素-POD浓缩液混匀,此工作液4℃可保存一周)。滴加链酶亲和素-POD工作液,20-37℃,30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤4次,每次5分钟。
8.DAB显色:根据用量,用PBS(pH7.2-7.4)配制,按1mlPBS加入50μl 20×DAB显色液A,加入50μl 20×DAB显色液B。充分混匀后滴加到切片上。室温显色,镜下控制反应时间,一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
9.苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。
对于细胞爬片,固定后,PBS漂洗两次,再用0.5% Triton X-100室温孵育20分钟,PBS漂洗两次,3%H2O2处理15分钟;PBS漂洗两次,接上述第4步。
对于冰冻切片,固定后,PBS漂洗两次,接上述第二步。
注意事项:
如果染色背景过高,在SP反应之后,DAB显色之前,用加有0.01-0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次,PBS洗2次,然后DAB显色。
具有显著特点:
灵敏度高,数据可靠,重现性好
操作简便,省时省力
水溶性,不需要换液,尤其适合于悬浮细胞
无需放射性同位素和有机溶剂,对细胞毒性低
为1瓶溶液,毋需预制,即开即用
适合于高通量药物筛选
细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。本产品仅供科研
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
免疫组化SP法检测试剂盒(小鼠/兔IgG)操作步骤:
1、用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液;
2、用0.5%胰蛋白酶:0.2%EDTA=1:1混合液来消化培养的贴壁细胞;
3、再加入适量Hanks液制成细胞悬液;
4、将待染色细胞稀释至所需浓度(方法及浓度范围与细胞计数相同);
5、每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴,室温下染3—5min;
6、染色过的细胞材料,取一滴细胞悬液置玻片上,加盖玻片后放高倍镜下观察;
7、死亡的细胞着浅蓝色并膨大,无光泽。活细胞不着色并保持正常形态,有光泽;
8、计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目;
9、统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活率
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文献和实验等,其中SP法是最常使用的方法。一般的sp法步骤啊,具体如下:1、烤片,68℃,20分钟,2、常规二甲苯脱蜡,梯度酒精脱水;二甲苯I20min⇒二甲苯II20min⇒100%酒精10min⇒100%酒精10min⇒95%酒精5min⇒80%酒精5min⇒70%酒精5min3、阻断灭活内源性过氧化物酶:3%H2O237℃孵育10min,PBS冲洗3X5min;4、抗原修复:置0.01M枸橼酸缓冲液(PH6.0)中用煮沸(95℃,15-20min),自然冷却20min以上,再用冷水冲洗缸子,加快冷却至室温
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