兔源一抗免疫组化检测试剂盒(FITC荧光+DAB显色)产品图

兔源一抗免疫组化检测试剂盒(FITC荧光+DAB显色)

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  • 2026年05月21日
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    • 英文名:

      SABC Kit-FITC(POD)(Rabbit IgG)

    • 保质期:

      详见说明书

    • 供应商:

      上海西格

    • 保存条件:

      低温冷藏

    • 规格:

      100T-200T

    产品名称:兔源一抗免疫组化检测试剂盒(FITC荧光+DAB显色)
    英文名称:SABC Kit-FITC(POD)(Rabbit IgG)

    产品规格:100T-200T
    发货周期:1~3天
    本试剂盒适合于一抗为兔IgG来源的免疫组化实验,DAB及FITC显色。SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质,同亲和素一样,对生物素有极高的亲和力,亲和素是一个碱性蛋白质(PI=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,对组织和细胞的非特异吸附很低,基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin-Biotin Complex,SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶或者FITC和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶与FITC将保证SABC具有很高的敏感性。
    保存:-20℃,如经常使用,可将封闭液,稀释液,20×DAB显色液B和抗荧光衰减封片剂存放于2~8℃以方便使用。
    操作步骤(以石蜡切片热修复为例):
    1.切片常规脱蜡至水。3% H2O2室温5~10分钟以灭活内源性酶(如果FITC,可省掉此步)。蒸馏水洗3次。
    2.热修复抗原:将切片浸入0.01M枸橼酸盐缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔5~10分钟后,反复1~2次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1~2次。
    3.滴加5% BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体,免洗。
    4.用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗 4℃可保存一周),也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗,37℃ 1小时孵育左右或20℃ 2小时左右,也可4℃过夜。PBS(pH7.2~7.4)洗涤3次,每次2分钟(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间)。
    5.根据使用量,用稀释液将bio-羊抗兔IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl bio-羊抗兔IgG浓缩液,混匀即成工作液,此工作液4℃可保存一周)。滴加生物素化羊抗兔IgG工作液,20~37℃处理30分钟。PBS(pH7.2~7.4)洗涤3次,每次2分钟。
      如果用荧光观察,请接步骤6、7,如果用DAB显色,请直接转至步骤8。
    6.根据使用量,用稀释液将SABC-FITC浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl SABC-FITC浓缩液,混匀即成SABC-FITC工作液。此工作液4℃可保存一周)滴加SABC-FITC工作液,20~37℃,30分钟(避光)。PBS(pH7.2~7.4)洗涤4次,每次5分钟。
    7.滴加抗荧光衰减封片剂封片。荧光显微镜观察。
    8.根据使用量,用稀释液将SABC-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl SABC-POD浓缩液,混匀即成SABC-POD工作液。此工作液4℃可保存一周),滴加SABC-POD工作液,20~37℃,30分钟。PBS(pH7.2~7.4)洗涤4次,每次5分钟。
    9.DAB显色:根据用量,用PBS(pH7.2~7.4)配制,按1ml PBS加入50μl 20×DAB显色液A,加入50μl 20×DAB显色液B,混匀后加至切片。室温显色,镜下控制反应时间,一般在5~30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
    10.苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。
    对于细胞爬片:常规固定后,PBS漂洗两次,再用0.5% Txiton X-100室温20分钟,PBS漂洗两次,3% H2O2(如果用FITC,刚可省掉此步)处理15分钟;PBS漂洗两次,下接上面第4步。
    对于冰冻切片:固定后,可用PBS漂洗两次,再接上面第二步。
    注意事项:
    1.如果用DAB染色背景过高,在SABC反应之后,DAB显色之前,用加有0.01~0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2~7.4)洗涤切片4次,PBS洗2次,然后DAB显色。
    2.如果用FITC观察背景过高,在SABC反应之后,用加有0.01~0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2~7.4)洗涤切片4次,PBS洗涤2次,然后封片观察。
    3.因为免疫组化指标众多,标本不一,此步骤仅作参考。
    兔源一抗免疫组化检测试剂盒(FITC荧光+DAB显色)细胞生物学研究有以下几个方面:
    细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括:
    ①细胞核、染色体以及基因表达的研究;
    ②生物膜与细胞器的研究;
    ③细胞骨架体系的研究;
    ④细胞增殖及其调控;
    ⑤细胞分化及其调控;
    ⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡);
    ⑦细胞的起源与进化;⑧细胞工程.
    细胞生物学研究的常用技术有哪些:
    1.显微技术:包括显微观察,显微操作.
    2细胞组分分析技术:离心分离技术,生物大分子定位技术,定量细胞化学分析技术.
    3.细胞工程:细胞培养。
    具有显著特点:本产品仅供科研
    灵敏度高,数据可靠,重现性好
    操作简便,省时省力
    水溶性,不需要换液,尤其适合于悬浮细胞
    无需放射性同位素和有机溶剂,对细胞毒性低
    为1瓶溶液,毋需预制,即开即用
    适合于高通量药物筛选
    细胞培养的优点:
    1.研究的对象是活细胞
    在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
    2.研究条件可以人为控制
    pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
    3.研究的样本可以达到比较均一性
    通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
    4.研究内容便于观察、检测和记录
    采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
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    操作步骤:本产品仅供科研
    1、用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液;
    2、用0.5%胰蛋白酶:0.2%EDTA=1:1混合液来消化培养的贴壁细胞;
    3、再加入适量Hanks液制成细胞悬液;
    4、将待染色细胞稀释至所需浓度(方法及浓度范围与细胞计数相同);
    5、每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴,室温下染3—5min;
    6、染色过的细胞材料,取一滴细胞悬液置玻片上,加盖玻片后放高倍镜下观察;
    7、死亡的细胞着浅蓝色并膨大,无光泽。活细胞不着色并保持正常形态,有光泽;
    8、计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目;
    9、统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活率


     

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