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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
48
- 英文名:
Instant Immunohistochemistry Kit For Primary Antibody From Rabbit Or Mouse
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海西格
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
80T|160T
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括:
①细胞核、染色体以及基因表达的研究;
②生物膜与细胞器的研究;
③细胞骨架体系的研究;
④细胞增殖及其调控;
⑤细胞分化及其调控;本产品仅供科研
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡);
⑦细胞的起源与进化;⑧细胞工程.
细胞生物学研究的常用技术有哪些:
1.显微技术:包括显微观察,显微操作.
2细胞组分分析技术:离心分离技术,生物大分子定位技术,定量细胞化学分析技术.
3.细胞工程:细胞培养。
产品名称:即用型免疫组化试剂盒(小鼠/兔源一抗)
英文名称:Instant Immunohistochemistry Kit For Primary Antibody From Rabbit Or Mouse
产品规格:80T|160T
发货周期:1~3天
本试剂盒采用SABC系统,适于一抗为小鼠或者兔来源的抗体。SABC 是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素对生物素分子有极高的亲和力,是一般抗原抗体亲和力的一百万倍,等电点 pI=6.0~6.5,对组织和细胞的非特异吸附很低。根据研究,SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶可以保证 SABC 具有很高的敏感性。所以 SABC 兼具高敏感性,低背景和操作简便等优点。采用独特方法的SABC不仅有很强的信号放大作用,而且非常稳定。
保存条件:4℃可保存一年,应避免冷冻。
石蜡片染色步骤:
1. 石蜡切片,常规脱蜡至水。
2. 3%H2O2去离子水室温孵育5-10分钟,以消除内源性过氧化物酶活性。PBS冲洗,5分钟×3次。
3. 根据需要选择抗原修复方式及强度。可热修复、酶修复或不修复。
4. 封闭。5%BSA封闭液 37℃孵育30分钟,甩干,勿洗。
5. 滴加一抗(小鼠或者兔IgG),37℃孵育1-2 小时或4℃过夜。PBS冲洗,5分钟×3次。
6. 滴加生物素标记山羊抗小鼠/兔IgG,37℃孵育30分钟。PBS冲洗,5分钟×3次。
7. 滴加 SABC,37℃孵育30分钟。PBS冲洗,5分钟×3次。
8. 显色:镜下控制反应时间。显色剂可选DAB(ZN1968)或AEC(ZN1963)。自来水充分冲洗。
9. 根据需要进行苏木素(ZN1971)复染,染色时间为0.5-2分钟。脱水,透明。
10. 选用中性树胶,水溶性封片剂(ZN2946)或其他适当的封片剂封片。
具有显著特点:
灵敏度高,数据可靠,重现性好
操作简便,省时省力
水溶性,不需要换液,尤其适合于悬浮细胞
无需放射性同位素和有机溶剂,对细胞毒性低
为1瓶溶液,毋需预制,即开即用
适合于高通量药物筛选
细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。本产品仅供科研
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
即用型免疫组化试剂盒(小鼠/兔源一抗)操作步骤:
1、用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液;
2、用0.5%胰蛋白酶:0.2%EDTA=1:1混合液来消化培养的贴壁细胞;
3、再加入适量Hanks液制成细胞悬液;
4、将待染色细胞稀释至所需浓度(方法及浓度范围与细胞计数相同);
5、每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴,室温下染3—5min;
6、染色过的细胞材料,取一滴细胞悬液置玻片上,加盖玻片后放高倍镜下观察;
7、死亡的细胞着浅蓝色并膨大,无光泽。活细胞不着色并保持正常形态,有光泽;
8、计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目;
9、统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活率
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文献和实验性免疫球蛋白产生交叉反应, 例如:检测小鼠样本蛋白,则不应选择小鼠或大鼠源的一抗,最好选兔源的一抗,则二抗则可选择偶联了检测分子(酶、荧光素、生物素等)的抗兔IgG。如果选择有偶联物的一抗则不适用上述情况,除免疫组化外的其它对不含内源性免疫球蛋白样本的检测方法,则抗体宿主物种的影响不大,如对不含IgG 的细胞裂解物样本的western blotting检测。 尽管如此,含有血清的组织裂解物和组织培养上清中含有免疫球蛋白,还原变性样本中含IgG,在western blot 检测中则结合
图 1 实验流程与常见问题索引 Q1:染色结果呈阴性,是怎么回事? (1)抗体来源选择错误:本试剂盒二抗为抗兔/鼠,请确保一抗来源的种属为兔源或鼠源。 (2)组织切片本身不存在目的蛋白:可通过 The Human Protein Atlas 数据库或 UniProt数据库查询目的蛋白在细胞或组织中的表达情况。 (3)抗体浓度和质量问题:提高抗体工作浓度或延长孵育时间;确认抗体可进行IHC实验,通过非IHC实验排除抗体质量问题。 (4)脱蜡不完全:可根据切片上是否存在透明颗粒,判断是否存在脱蜡
,则不应选择小鼠或大鼠源的一抗,最好选兔源的一抗,则二抗则可选择偶联了检测分子(酶、荧光素、生物素等)的抗兔IgG。 如果选择有偶联物的一抗则不适用上述情况,除免疫组化外的其它对不含内源性免疫球蛋白样本的检测方法,则抗体宿主物种的影响不大,如对不含IgG 的细胞裂解物样本的western blotting检测,尽管如此,含有血清的组织裂解物和组织培养上清中含有免疫球蛋白,还原变性样本中含IgG,在western blot 检测中则结合出现IgG 分子50 and 25 kDa 的重链和轻链
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