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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
44
- 英文名:
Blocking Buffer(10×)
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海西格
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
100ml
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括:
①细胞核、染色体以及基因表达的研究;
②生物膜与细胞器的研究;
③细胞骨架体系的研究;
④细胞增殖及其调控;
⑤细胞分化及其调控;本产品仅供科研
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡);
⑦细胞的起源与进化;⑧细胞工程.
细胞生物学研究的常用技术有哪些:
1.显微技术:包括显微观察,显微操作.
2细胞组分分析技术:离心分离技术,生物大分子定位技术,定量细胞化学分析技术.
3.细胞工程:细胞培养。
产品名称:封闭液(10X浓缩,不含去垢剂)
英文名称:Blocking Buffer(10×)
产品规格:100ml
发货周期:1~3天
本品是新一代的快速高效封闭液,总体效果显著优于传统的基于BSA(牛血清白蛋白)、脱脂奶粉、酪蛋白(Casein)等的封闭液及国外同类产品,可以用于Western blot (WB)、Immunofluorescence (IF)、Immunohistochemistry (IHC)、Immunocytochemitry (IC) 等实验中的封闭、一抗或二抗的稀释。本产品为10倍浓缩(10X)溶液,不含去垢剂。按照每张膜封闭需要5-10ml 封闭液(1X)计算,一个包装的本产 品可以封闭100-200张膜。
本封闭液快速高效。封闭时间通常仅需5-15分钟,并且和BSA、脱脂奶粉、酪蛋白等传统封闭液以及国外同类的快速 封闭液相比,显示出更强的信噪比(参考下图)。
本封闭液封闭后背景极低。本封闭液不含血清和白蛋白,确保极高的信噪比。
本封闭液兼容性好,兼容辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶和生物素标记的二抗。本产品中添加了不影响HRP和AP活性的防腐剂,不会干扰HRP或AP标记二抗的检测。同时本产品不含生物素,不会干扰基于生物素的检测。
本封闭液使用灵活。本产品配制在含有适当浓度Triton X-100的TBS中,可以直接用于相关实验,但也可以根据实验需要自行添加Tween-20或Triton X-100 至终浓度为0.05%-0.1%后用于封闭、一抗或二抗的稀释。
注意事项:
1. 本产品推荐仅使用一次,重复使用可能会导致封闭效果下降。但对于一些信噪比 很高的一抗,例如一些内参抗体,本封闭液可以重复使用2-3次。回收的封闭液请勿与未使用过的封闭 液混合。
2. 通常本产品用于PVDF膜及NC膜时的封闭时间为5-15分钟。对 于一些背景非常高的抗体,可以尝试将封闭时间延长为30-60分钟。此外,如有特殊需要,也完全可以 4℃封闭过夜。
3. 由于没有任何一种封闭液是适用于所有实验体系的,因此对于一些特殊的实验,可能需要 根据具体情况考虑使用其它更合适的封闭液。
4. 取放PVDF膜和NC膜应使用平头镊子,并仅轻轻夹取其边角,操作过程须避免 膜表面产生划痕、折痕或压痕等痕迹。
5. PVDF膜一经浸润和活化,需一直保持湿润,根据Western进行 到的具体步骤可放置于western转膜液或洗涤液等适当溶液中,否则可能会产生难以封闭的异常背景。
6. 在背景较高的情况下,为进一步提高信噪比,本产品稀释至1X后可以自行添加 Tween-20或Triton X-100至终浓度为0.05%-0.1%。
储存条件:4℃,有效期一年。
具有显著特点:
灵敏度高,数据可靠,重现性好
操作简便,省时省力
水溶性,不需要换液,尤其适合于悬浮细胞
无需放射性同位素和有机溶剂,对细胞毒性低
为1瓶溶液,毋需预制,即开即用
适合于高通量药物筛选
细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。本产品仅供科研
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
封闭液(10X浓缩,不含去垢剂)操作步骤:
1、用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液;
2、用0.5%胰蛋白酶:0.2%EDTA=1:1混合液来消化培养的贴壁细胞;
3、再加入适量Hanks液制成细胞悬液;
4、将待染色细胞稀释至所需浓度(方法及浓度范围与细胞计数相同);
5、每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴,室温下染3—5min;
6、染色过的细胞材料,取一滴细胞悬液置玻片上,加盖玻片后放高倍镜下观察;
7、死亡的细胞着浅蓝色并膨大,无光泽。活细胞不着色并保持正常形态,有光泽;
8、计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目;
9、统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活率
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文献和实验它们都是BSA A、请问各位高手,在进行免疫荧光的实验时,浸一抗之前,要用的封闭液中1%的BSA是怎么配制? 封闭液封闭后还用PBS 清洗干净再浸一抗吗? 1.可以直接用0.02M的PBS 配制 2.不用PBS 清洗干净,直接浸一抗。 B、各位高手,间接法中我想摸索封闭液BSA的最佳浓度,用抗原 包被后,用不同浓度的BSA(0.5%,1%,2%,3%)封闭,其他条件固定,测得 OD450nm后,可以看出随着BSA浓度
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