CEN5p（R6G）鱼探针/CEN5p（R6G）鱼探针/CE

如何做好 Southern 杂交？

加入：Labeling 5× buffer 10 μl（含有随机引物）dNTPmix 2 μl(含 dCTP、dGTP、dTTP 各 0.5 mM)BSA（小牛血清白蛋白）2 μl[ a -32 P]dATP 3μlKlenow 酶 5 U3. 将变性模板 DNA 加入到上管中，加 ddH2O 至 50 μl，混匀。室温或 37 ℃ 1 hr。4. 加 50 μl 终止缓冲液终止反应。标记后的探针可以直接使用或过柱纯化后使用。由于 a -32 P 的半衰期只有 14 天，所以标记好的探针应尽快使用。探针的比活性最好

荧光原位杂交技术检测植物基因组中整合的转基因片段

水溶液。 ( 4 ) 载玻片：玻片浸润于 80%  ( V/V ) 三氧化铬的硫酸溶液中至少 3 h，蒸馏水洗涤，风干，用前用 96% 的乙醇擦拭（见注 3) 。 ( 5 ) 玻璃盖玻片：18 mm x 18 mm 规格，No. 1 (见注4 ) ( 6 ) 解剖针及镊子（ 如 5 号）。 ( 7 ) 干冰或液氮。 2.3 探针标记 ( 1 ) 标记试剂盒：基于随机引物法或者缺口前移法（如 Invitrogen 和 Roche 公司产品）。 ( 2 ) 标记好的核苷酸（如果试剂盒中未

分子生物学常用实验技术（page 3)

平移缓冲液5μl 待标记的DNA 1μg [α-32 P]dCTP 或dATP(70μCi) 7μl E.coli DNA 聚合酶4 单位 DAN 酶I 1μl 加水至终体积50μl (2) 置于15℃水浴60 分钟。 (3) 加入5μl EDTA 终止反应。 (4) 反应液中加入醋酸铵,使终浓度为0.5mol/L, 加入两倍体积预冷无水乙醇沉淀回收DNA探针。 [注意] 1、3H，32P 及35S 标记的dNTP 都可使用于探针标记，但通常使用[α-32 P