我公司是一家提供生物医学研究产品(不用于临床体外诊断)和服务的科技企业。科研人员利用丰富的经验,发扬创新精神,研制生产出一系列高质量的标记酶底物液、染色液,各种生物缓冲液和稳定剂,以及制备多抗和单抗所需要的佐剂、抗原载体、亲和填料等。
公司新推出的杂交瘤专用系列培养基,能极大简化细胞融合的流程,通过半固体培养基克隆化培养,直接培育出单克隆细胞,再不需要复杂费时的细胞克隆化流程,缩短周期至少14天以上。此外公司还提供单抗多抗的定制制备、标记和试剂盒开发服务。
客服联系电话:赵女士18600635977
杂交瘤1号培养基(含血清)
产品编号:8101
杂交瘤1号培养基是在Sigma-Aldrich DMEM基础上添加适当营养成分和注射用水配制而成,含有胎牛血清、及促杂交瘤生长因子。
本产品经小鼠杂交瘤细胞制备测试,应用于细胞融合前骨髓瘤细胞的扩增和杂交瘤筛选后稳定的杂交瘤克隆的培养。
试剂组成和规格
500ml/瓶
运输、储存和有效期
冷藏运输,-20°C储存,在有效期内使用。 正常储存条件下自生产之日起有效期2年。
杂交瘤2号培养基(不含血清)
产品编号:8102
杂交瘤2号培养基是在Sigma-Aldrich DMEM基础上添加适当营养成分和注射用水配制而成及促杂交瘤生长因子。
本产品经小鼠杂交瘤细胞制备测试,应用于杂交瘤融合前和融合中洗涤淋巴细胞和骨髓瘤细胞。
试剂组成和规格
500ml/瓶
运输、储存和有效期
冷藏运输,-20°C储存,在有效期内使用。 正常储存条件下自生产之日起有效期2年。
杂交瘤3号培养基(含血清)
产品编号:8103
杂交瘤3号培养基是在Sigma-Aldrich DMEM基础上添加适当营养成分和注射用水配制而成,含有胎牛血清、及促杂交瘤生长因子。
本产品经小鼠杂交瘤细胞制备测试,应用于细胞融合后加HAT选择培养前促进细胞的活力恢复。
试剂组成和规格
100ml/瓶
运输、储存和有效期
冷藏运输,-20°C储存,在有效期内使用。 正常储存条件下自生产之日起有效期2年。
杂交瘤4号培养基(半固体,含血清)
产品编号:8104
杂交瘤4号培养基是在Sigma-Aldrich DMEM基础上添加适当营养成分、甲基纤维素、HAT和注射用水配制而成的半固体培养基,含有胎牛血清、及促杂交瘤生长因子。
本产品经小鼠杂交瘤细胞制备测试,应用于杂交瘤细胞融合后一步法筛选克隆。单个杂交瘤细胞在半固体培养基中生长形成克隆,避免在液体培养基中快速生长的细胞克隆致使慢生长细胞克隆的丢失。半固体培养基使容易挑选单克隆,一步法筛选克隆省时,克隆效率高。
试剂组成和规格
90ml/瓶
运输、储存和有效期
冷藏运输,-20°C储存,在有效期内使用。 正常储存条件下自生产之日起有效期2年。
杂交瘤5号培养基(含血清)
产品编号:8105
杂交瘤5号培养基是在Sigma-Aldrich DMEM基础上添加适当营养成分和注射用水配制而成,含有胎牛血清、及促杂交瘤生长因子和HT, 培养基添加的HT成分在杂交瘤筛选过程中逐渐替换氨基蝶呤。
本产品经小鼠杂交瘤细胞制备测试,应用于杂交瘤筛选过程中逐步替代氨基蝶呤。
试剂组成和规格
500ml/瓶
运输、储存和有效期
冷藏运输,-20°C储存,在有效期内使用。 正常储存条件下自生产之日起有效期2年。
使用方法
- 用前从冷冻室取出,置于15~20℃,或2~8℃过夜融化,混匀。不要置于37℃水浴融化。
- 融化的培养基可在2~8℃储存至1个月,或分装后冻存于-20℃,至有效期
细胞融合步骤
1. 将108脾细胞和2x107骨髓瘤细胞(分别悬浮在25ml杂交瘤2号培养基)混合。
2. 1000rpm(200-400g)离心5-10分钟。
3. 彻底吸除上清,避免在后面的操作中稀释PEG。
4. 轻轻敲击试管底部,打散细胞团,将试管放入37℃水浴中,融合过程在水浴中进行。
5. 用1ml吸管将1ml预热37℃的50%PEG1500加入到细胞团中,边加边用吸管头轻轻搅拌,1分钟内加完。
6. 继续搅拌50%PEG1500中的细胞1-2分钟。
7. 缓慢加1ml预热37℃的杂交瘤2号培养基,边加边搅拌,1分钟内加完。
8. 缓慢加4ml预热37℃的杂交瘤2号培养基,边加边搅拌,2钟内加完。
9. 缓慢加10ml预热37℃的杂交瘤2号培养基。
10. 37℃孵育5分钟, 。
11. 1000rpm(200-400g)离心5-10分钟
12. 移去上清,将细胞悬浮于杂交瘤3号培养基10ml中,用粗口尖吸管轻轻吹散,在37℃5%CO2条件下培养过夜(16~24小时)。
一步法在96孔板中进行杂交瘤筛选和克隆
1. 将杂交瘤4号培养基90ml(含HAT半固体培养基)提前一天在2~8℃过夜融化。
2. 在细胞融合当天,烈摇动融化的杂交瘤选择培养基并预热到室温。
3. 将10ml前一天融合的细胞悬液与90ml杂交瘤4号培养基混合,轻轻翻转细胞瓶6次,静置15分钟。
4. 用多通道枪或滴管在96孔培养板中每孔加入100 μl。
5. 在37℃ 5%CO2二氧化碳培养箱中培养8天。
6. 每孔加150μl杂交瘤5号培养基。
7. 在37℃ 5%CO2二氧化碳培养箱中再培养2~4天。
8. 每孔取50μl培养上清,进行抗体检测。阳性孔检查克隆数,含有单个克隆的孔可用弯头滴管吸取细胞转移到每孔含有200ul 杂交瘤5号培养基的96孔板中;如果含有2个或3个克隆,且距离足够远,不会互相混合生长,可分别将每个克隆单独转移到每孔含有200ul 杂交瘤5号培养基的96孔板中;如果克隆之间不能分开,需要用传统方法克隆(如有限稀释法)。
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