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人类胚胎干细胞

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  • SHBio
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  • SHC3408
  • 2025年07月16日
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    • 英文名

      SHCC

    • 库存

      100

    • 供应商

      赛泓瑞生物

    • 细胞类型

      人类胚胎干细胞

    • 运输方式

      干冰/常温

    • 年限

      10年

    • 生长状态

      贴壁/悬浮

    • 规格

      1*10^6cell/T25

    产品名称: BG01V
    商品货号:SHC-2899
    中文名称:人类胚胎干细胞
    组织来源:人胚胎内细胞团
    形态特征:球形克隆
    特征特性:性别染色体XXY
    细胞污染:HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌检测阴性。
    培养条件:DMEM/F12 (Invitrogen, 11330) 461.5 ml Sodium Pyruvate(Invitrogen 11360070) 3 ml Sodium bicarbonate 1.2 g/L L-Glutamine (Invitrogen 25030) 7.5 ml L-Alanyl-L-Glutamine(SIGMA A8185-5G) 终浓度2.0 mM Non-essential Amino Acids, 100X (Invitrogen, 11140) 6 ml 55mM 2-mercaptoethanol (Invitrogen, 21985) 1.1 ml bFGF (Invitrogen, 13256) 4 ng/ml Knockout Serum Replacement(Invitrogen, 10828) 30 ml FBS(biochrom S4115) 90 ml
    细胞冻存步骤:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例; 1.细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入2ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。 2.1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。明舟生物按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
    复苏细胞步骤:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
    细胞传代步骤:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

     

    细胞操作_06.jpg新建 PPTX 演示文稿_01.jpg新建 PPTX 演示文稿_02.jpg新建 PPTX 演示文稿_03.jpg

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