免疫共沉淀(Co-IP)

一、免疫共沉淀（Co-IP）概述

        免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation, Co-IP）是利用抗原和抗体的特异性结合以及细菌的ProteinA或G特异性地结合到免疫球蛋白的Fc片段的原理开发出来的方法。其基本原理是，为了研究细胞中蛋白A与蛋白B是否结合，在细胞裂解液中加入抗蛋白A的抗体，孵育后再加入与抗体特异结合的结合于Agarose珠上的ProteinA或G，若细胞中有与蛋白A结合的蛋白B，就可以形成这样一种复合物：“蛋白B—蛋白A—抗蛋白A抗体—agaroseProteinA或G”，经变性聚丙/烯酰胺凝胶电泳，复合物又被分开。蛋白B然后经western blot或质谱检测目的蛋白。蛋白A这种方法得到的蛋白B是在细胞内与兴趣蛋白天然结合的，符合体内实际情况，得到的结果可信度高。
        

二、技术流程

        1、收集经过处理的细胞，加入适量细胞裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂），冰上裂解30 min, 细胞裂解液于4°C，12000转离心30 min后取上清；
        2、取少量裂解液以备免疫印迹分析，剩余裂解液中加入适量的相应抗体，4 °C缓慢摇晃孵育过夜；
        3、取10μL protein A 或GAgarose珠，用适量裂解缓冲液洗3次，每次3000 rpm离心3 min；
        4、将预处理过的10 μl protein A 或G琼脂糖珠加入到经过与抗体孵育的细胞裂解液中，4 °C缓慢摇晃孵育2~4h，使抗体与protein A或GAgarose珠偶联；
        5、免疫沉淀反应后，在4 °C以3000 rpm 速度离心3min，将琼脂糖珠离心至管底；将上清小心吸去，琼脂糖珠用1mL裂解缓冲液洗3－4次；最后加入15 μL的3×SDS 上样缓冲液，沸水煮5分钟；
        6、SDS-PAGE, 免疫印迹或质谱仪分析。
 

三、样品要求

        1、顾客提供：蛋白质样品（组织、细胞、蛋白质溶液等）、用于免疫共沉淀的一抗及目的蛋白的相关信息；
        2、需要通过转染载体表达基因的，提供表达载体，或由本公司构建载体；
        3、其他免疫共沉淀相关信息。
        运输要求：干冰包装寄送

四、报告内容及标准

        1、免疫共沉淀电子图片及分析结果；
        2、相互作用蛋白鉴定结果，质谱鉴定结果和（或）western blot鉴定结果；
        3、完整的实验步骤、软件检索等参数
        根据甲方要求而制定具体的内容，详细请依所签约合同的内容为准。
 
 
五、收费标准及服务周期

        收费标准及服务周期因根据客户提供的样品不同而有所改变，详细请跟客服专员联系或参考所签署的合作合同。
 
 

六、质量保证

        提供客观、公正的免疫共沉淀实验结果

 
七、售后服务

        本公司会不定期进行顾客回访，以提高我们的服务质量。本条款以所签订的合作合同为依归，详情会因合同内容的不同而有所差异。
 
      

 

 成功案例

 

      详情请咨询汉恒生物技术工程师400-092-0065。