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SDSPAGE蛋白上样缓冲液(变性)(1×)

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  • 上海莼试
  • CS-X13939
  • 进口、国产
  • 2026年01月09日
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    • 英文名

      详见说明书

    • 保质期

      一年有效

    • 供应商

      上海莼试

    • 保存条件

      -20℃保存

    • 规格

      10ml

    注意事项:
        SDSPAGE蛋白上样缓冲液(变性)(1×) 尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响,但为取得良好的使用效果,3-6个月内推荐4℃保存,并适当注意避免反复冻融。
          如果有细菌或真菌污染,会严重影响检测效果。
          染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
          如果细胞收集过程中使用了胰酶,需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC,导致染色失败。
          荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
          用于流式细胞仪检测时,如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞,并且通过调整相关设置和参数也无法改善,可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测,这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
          需自备PBS。
          本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
          为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    产品细节图片1
    中文名称:SDSPAGE蛋白上样缓冲液(变性)(1×)
    英文名称:

    产品规格:10ml
    发货周期:1~3天
    产品保存:-20℃保存,一年有效
    产品说明:SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液(SDS-PAGE Sample Loading Buffer,1×),是一种经过改良的以溴酚蓝为染料的蛋白上样缓冲液。可以直接用于细胞或组织样品的裂解,并用于后续常规的SDS-PAGE 蛋白样品的上样。使用 SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液(1×)直接裂解蛋白样品的优点是比较便捷;缺点是裂解好的蛋白样品不能用常规的Bradford 法或BCA 法测定蛋白浓度。这样蛋白上样量的均一性就较难控制,需要借助考马斯亮蓝等的染色结果或
    Western的检测结果,来调整上样量。当细胞量或组织用量能控制得比较均一时,使用本裂解液直接裂解获取蛋白样品会比较便捷。
    本产品也可以用于 SDS-PAGE 时待上样蛋白样品的稀释等。
    注意事项:
    1.SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液(1×)中含少量 DTT,有轻微刺激性气味,但不含剧毒的巯基乙醇。
    2.SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液(1×)必须完全溶解后再使用。
    使用说明:
    1.在室温或不超过 37℃的水浴中溶解 SDS-PAGE 上样缓冲液(1×)。水浴溶解后立即室温存放,尽量避免长时间 置于水浴中。
    2.对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升 SDS-PAGE 上样缓冲液(1×)的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使 SDS-PAGE 上样缓冲液(1×)和细胞充分接触。通常 SDS-PAGE 上样缓冲液
    (1×)接触细胞 1-2 秒后,细胞就会被裂解。裂解后的样品收集到一洁净离心管内。
    3.对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升SDS-PAGE上样缓冲液(1×)的比例加入 SDS-PAGE 上样缓冲液(1×)。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/管,然后再进行裂解。
    4.对于组织样品:
    A.把组织剪切成细小的碎片。
    B.按照每 20 毫克组织加入 150-250 微升 SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液(1×)的比例加入 SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液(1×)。(如果裂解不充分可以适当添加更多的SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液(1×),如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少 SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液(1×)的用量。)
    C.用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
    D.充分裂解后,将样品收集到一洁净离心管内。
    说明:如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈 vortex 使样品裂解充分。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
    5.100℃或沸水浴加热 5-10分钟,以充分变性蛋白。说明:煮沸前通常会发现蛋白样品内有粘稠的半透明状物体,通常在本上样缓冲液内沸水浴煮沸 8-10分钟后可以确保该粘稠的半透明状物体消失,以便于后续的上样操作。
    注意:如果起始时细胞或组织的用量较大,基因组 DNA 含量较高,煮沸 5-10分钟后有可能仍然比较粘稠或者有粘稠状的半透明物体。此时需要再煮沸 5-10分钟或者加入适量 1×的蛋白上样缓冲液后再煮沸 3-5分钟。充分煮沸后一方面可以使结合在基因组 DNA 上的蛋白充分放,同时会导致基因组 DNA的部分断裂从而使粘稠感消失,这样就不会影响后续的上样操作了。
    6.冷却到室温后,室温稍离心一下以沉淀可能出现的杂质等,上清即可直接上样到 SDS-PAGE 胶加样孔内即可。通常电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。
    细胞培养的优点:
    1.研究的对象是活细胞
    在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
    2.研究条件可以人为控制
    pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
    3.研究的样本可以达到比较均一性
    通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
    4.研究内容便于观察、检测和记录
    采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
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    细胞生物学研究有以下几个方面。
    细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
    ①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
    ②生物膜与细胞器的研究。
    ③细胞骨架体系的研究。
    ④细胞增殖及其调控。
    ⑤细胞分化及其调控。
    ⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
    ⑦细胞的起源与进化。
    ⑧细胞工程。


     

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