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- 2025年07月10日
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上海康晶生物
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双向电泳及质谱分析
质谱技术的发展到能快速识别和鉴定取自单个2-D凝胶斑点微量的蛋白质和多肽。
双向电泳的应用包括蛋白质组分析、细胞差异性分析、疾病标志检测、治疗检测、药物开发、癌症研究、纯度检测和微量蛋白纯化。
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文献和实验上，然后被转化为光电信号记录成质谱图。根据质谱图的位置可进行定性和结构分析，而根据峰的强度可进行定量分析。 质谱分析法的特点与应用范围是： （ 1 ）主要用以确定分子量。广泛用于有机物的分析，也可作为结构分析之用，因此是很好的定性分析的工具。 （ 2 ）灵敏度高。目前用于有机物分析的质谱仪的灵敏度可达到 100pg 数量级。 （ 3 ）操作简单，分析时间短，准确度高。 （ 4 ）与色谱仪联用，对混合物试样可以同时进行分离
【目的和要求】 1、 学习和掌握蛋白质双向电泳的基本原理和方法。 2、 了解双向电泳技术在蛋白质组学研究中的应用。 【实验原理】 蛋白质的双向电泳的第一向为等电聚焦（Isoelectrofocusing,IEF）,根据蛋白质的等电点不同进行分离；第二向为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），按亚基分子量大小进行分离。经过电荷和分子量两次分离后，可以得到蛋白质分子
实验步骤 1. 胶内酶切随机选择重复性好，差异显著，无明显变形、拖尾，与周围蛋白点分离明确的蛋白点作为质谱分析对象，进行胶内酶解。 1) 从胶上切取蛋白质凝胶颗粒置入96孔培养板内，用去离子水清洗数次。 2) 加50 ul脱色液[30 mmol/L potassium ferricyanide和100 mmol/L sodium thiosulfate 1：1]在室温下震荡至凝胶中棕黄色褪尽，弃去溶液
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