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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
大量
- 英文名:
Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase, 50 U/μL
- 保质期:
有效期2年
- 供应商:
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 保存条件:
冰袋运输 -20℃保存
- 规格:
100μL
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
| Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase, 50 U/μL | 10730ES01 | 100 μL | 5152.00 |
| Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase, 50 U/μL | 10730ES03 | 1 mL | 询价 |
| Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase, 50 U/μL | 10730ES25 | 25 mL | 询价 |
产品描述
Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase是Hieff UNICON® Taq抗体(货号:30301ES)和Hieff® Taq DNA Polymerase(货号:10101ES)的混合产品。Hieff UNICON® Taq抗体与Hieff® Taq DNA Polymerase具有很高的亲和力,高温50℃处理30 min,依旧可以封闭Hieff® Taq DNA Polymerase的活性。本品在预变性温度下加热30 sec完全失活,释放出DNA聚合酶活性。使用该热启动Taq酶可以有效抑制引物非特异性退火导致的扩增。
Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase适用于热启动PCR和qPCR。本品中的Hieff® Taq DNA Polymerase是热稳定重组型DNA聚合酶,具有较高的模板亲和力,非常适合低拷贝模板的扩增。扩增产物具有3′-dA,可轻松克隆T载体。

产品组分
| 编号 | 组分 | 10730ES01 (100 μL) | 10730ES03 (1 mL) |
10730ES25 (25 mL) |
| 10730-A | HotStart Taq DNA Polymerase (50 U/μL) | 100 μL | 1 mL | 25 mL |
产品应用
低拷贝基因扩增、基因型鉴定
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,74℃,30 min内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位(U)。
质量控制
DNA聚合酶活性封闭性检测:在Hieff UNICON® HotStart Taq Buffer (Mg2+ Plus)中,65℃孵育30 min,活性释放低于5%。
DNA聚合酶活性释放检测:在Hieff UNICON® HotStart Taq Buffer (Mg2+ Plus)中,95℃加热30 sec,活性释放高于95%。
核酸外切酶残留检测:20 μL反应体系,10 U本品和0.6 μg λ-HindIII,74℃孵育1 h,DNA的电泳谱带无变化。
核酸内切酶残留检测:20 μL反应体系,10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA,74℃孵育1h,DNA电泳谱带无变化。
大肠杆菌残留DNA检测:50 μL体系中,加入2 U本品,以无菌ddH2O为模板,扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1%琼脂糖凝胶电泳,EB染色,无扩增条带。
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存,有效期2年。
PCR反应体系(50 μL)
| 组分 | 体积 (μL) | 终浓度 |
| ddH2O | to 50 | - |
| 2×Taq Buffer(含Mg2+、dNTP) | 25 | 1× |
| 模板DNA | 适量 | - |
| Primer正向 (10 μM) | 2 | 0.4 μM |
| Primer反向 (10 μM) | 2 | 0.4 μM |
| Hieff UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase (50 U/μL) | 0.05 | 2.5 U/50 μL |
2)聚合酶浓度:推荐使用2.5 U/50 μL。可以在1.25-5 U/50 μL之间进行优化。
3)Mg2+终浓度:体系终浓度为2 mM。如有特殊需要,可用25 mM MgCl2,以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索。
4)不同模板的推荐使用量(50 μL反应体系):
| 模板种类 | 模板使用量 |
| 基因组DNA | 50 ng-200 ng |
| 质粒DNA | 100 pg-20 ng |
| cDNA | 1-5 μL (不超过反应体系的1/10) |
PCR扩增程序
| 循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 1 min | 1 |
| 变性 | 95℃ | 10 sec | 35-40 |
| 退火 | 60℃ | 20 sec | |
| 延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | |
| 终延伸 | 72℃ | 10 min | 1 |
2)延伸温度和时间:温度推荐使用72℃。时间推荐使用30 sec/kb。
3)扩增产物:请将PCR扩增产物放置于-20℃保存,防止DNA发生降解。
4)扩增程序:本产品用于定量实验,可使用2步法程序扩增,去掉延伸步骤,退火和延伸合为一步,对应的时间常用30 sec或根据仪器型号设置,如Applied Biosystems 7300需用31 sec以上。
注意事项
1)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
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product is obtained. 5.Taq DNA Polymerase. Usually 1-1.5u of Taq DNA Polymerase are used in 50µl of reaction mix. Higher Taq DNA Polymerase concentrations may cause synthesis of nonspecific products. However, if inhibitors are present in the reaction
为24个核苷酸/秒.温度过高(90℃以上) 或过低(22℃)都可影响Taq DNA聚合酶的活性,该酶虽然在90℃以上几乎无DNA合成, 但确有良好的热稳定性,在PCR循环的高温条件下仍能保持较高的活性.在92.5℃、95℃ 、97.5℃时,PCR混合物中的Taq DNA聚合酶分别经130min,40min和5~6min后,仍可 保持50%的活性,实验表明.PCR反应时变性温度为95℃~20sec,50个循环后,Taq DNA聚合酶仍有65%的活性.Taq DNA聚合酶的热稳定性是该酶用于PCR反应







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