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文献和实验底物范围较广,包括二氨基联苯胺 (DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。 二氨基联苯胺/金属盐 DAB 是辣根过氧化物酶最敏感、常用的底物。它产生强烈的棕色产物,在水和醇中不溶解。多数情况下,推荐在 DAB 中加入不同的金属离子。当加入金属盐如钴、镍至底物液中,辣根过氧化物酶可以更加敏感。此类反应产物呈暗蓝灰色至黑色,且在水及醇中稳定。DAB/金属盐染色应用的组织染色范围较广。 1. 需要的溶液和特殊设备 DAB,0.05 mol/L Tris 缓冲液 (pH7.6), 0.3% (W
素与生物素高度特异性结合的关系来放大免疫组化信号,但此方法有产生内源性生物素背景的可能性。而酶标聚合物法,利用聚合物与二抗结合,形成聚合物-二抗复合物,实现信号放大,该方法不受内源性生物素的干扰。 表 2 免疫组化多种检测系统分类 图 2 酶标聚合物法检测系统 图 3 链霉亲和素-生物素法检测系统 在显色法中,针对 HRP(辣根过氧化物酶)显色系统,其常用底物为DAB/AEC(HRP/DAB 呈棕褐色染色,具有很好的光稳定性,HRP/AEC 呈红色染色,在阳光下会褪色,不易保存。 基础 IHC
。 将修复盒从微波炉中拿出,自然冷却降温,当修复液降至室温后取出玻片,PBS(pH 7.4)冲洗3遍,每次3 min(冲洗过程中切勿对着组织冲洗,以免弄破组织)。 灭活 将配制好的 3 %的过氧化氢(去离子水稀释30%过氧化氢)滴加于切片组织上以阻断内源性过氧化物酶,室温孵育15 min,PBS 冲洗 3 次,每次 3 min。 抗体孵育 吸水纸吸干 PBS,在玻片上滴加 5%的正常血清(与二抗种属来源一致或相似),37 ℃封闭 30 min。 用吸水纸擦干玻片组织周围的液体,用油
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