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250ul
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文献和实验蛋白或者多肽的分离辨别。其中GE的从2kD到16kD之间有6条带的蛋白标准挺不错,另外提醒一句,特别小的蛋白Marker条带如果要显色好,上样一定要上足够的量哦。 二.预染蛋白分子量标准 预染蛋白分子量是一些纯化好的蛋白混合物,通过与染料共价耦联,在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到。预染蛋白分子量的出现方便了我们的实验,这种蛋白分子量标准可以帮助我们在电泳时、电泳后,以及转膜后监测电泳情况和估计迁移率——比如,已知垂直电泳最佳分辨区域大约在胶的2/3处。如果使用预染Marker
子量蛋白标准 通常在检测大分子量蛋白经常使用到高分子量蛋白标准, ③ 低分子量蛋白标准 在一般的蛋白电泳当中,更常用的是低蛋白标准分子量,除了有指示蛋白大小的作用以外,有时还可以用作粗略的定量。实验室用在一般蛋白电泳的低分子量蛋白标准中。 在低分子量蛋白标准这里还包括可特别小的蛋白标准,比如30kD以下蛋白或者多肽的分离辨别。其中GE的从2kD到16kD之间有6条带的蛋白标准挺不错,另外提醒一句,特别小的蛋白Marker条带如果要显色
分子量这么小,用的SDS-PAGE胶浓度大一点,15%,跑胶时间不用太长,看见溴酚蓝跑的分离胶的中或中下部就停了,marker应该有专门小分子量预染marker,你找试剂公司的人跟他们讲一下你的要求,一般他们会有合适推荐给你的。转膜条件得摸,可以先按照实验室经常用的转膜条件试一下,如果是实验室转膜的目的蛋白分子量比如40kd用2h,你可以用1个小时试一下,转完以后的SDS-PAGE胶可以放到考马斯亮蓝染液染一下,看看小分子量蛋白转的情况,一抗先按照说明书建议的最高浓度做,二抗按照你所在实验
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