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文献和实验曲线是否准确。4. 加入标准品的时候枪头一定不能有残留,否则容易引起较大误差,建议初学者刚开始时做 2 到 3 个标准品复孔。5. Bradford 法加完样之后需立刻马上测量,OD 值能稳定保持 10 分钟左右,如果不能马上测量,建议换用 BCA 法。6. 终极大招:如果你已经是老司机了,还有个方法不用测蛋白浓度,只要在显微镜下估测各组细胞密度差不多,直接提蛋白变性上样跑 WB 即可。但老司机也有翻车的时候,请慎用。只用10秒添加丁香实验随时下拉微信搜索实验ღ( ´・ᴗ・` )手机用户↓电脑用户
发光基团pNA游离出来,可通过酶标仪或分光光度计(λ=405nm 或400nm)测定其吸光值,通过测定吸光度来检测Caspase的活性。 二、自备试剂 PBS、蛋白定量试剂盒(Bradford法,选用) 三、实验操作指南 1.准备工作: A、 裂解液溶解后混匀,冰浴备用。 B、 裂解液工作液制备:每50 μL裂解液中加入0.5 μL DTT,冰浴备用。 2.样本处理: A、悬浮细胞 1) 诱导完成后的细胞,2000 rpm离心5 min,弃上清,收集细胞,PBS轻轻重悬细胞并计数
的标准蛋白作标准品。如果只需要相对蛋白浓度,那么任何一种纯化蛋白均可作为对照标准品。 Bio–Rad 提供两种蛋白标准品,小牛gamma−球蛋白和牛血清白蛋白(BSA)标准品。当你用Quick Start Bradford和Bio–Rad 蛋白测定试剂盒测定蛋白浓度时,那么标准品的选择就要慎重一些。如果你的样品中主要含有白蛋白,那么BSA将是一个好选择。如果你的样品包含了多种蛋白,gamma-球蛋白可能更合适。而DC和RC DC蛋白测定就几乎不受到标准品的影响,你爱选哪个选
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