EDC • HCl

蛋白质间相互作用研究方法3：BIAcore

/L HCl 各 100 μ l 的小管置于 BIAcore 自动进样器架的适当位置。 4． 将一个空管置于 BIAcore 自动进样器架上。 5． 开动仪器，以 5 μ l/min 的流速流过一个流动池。 6． 将 75 μ l 的 NHS 加入到一个空管中。 7． 在同一个管中再加入 75 μ l 的 EDC 。 8． 将含有 NHS 和 EDC 的小管中的成分混匀。 9． 注射 35 μ l NHS/EDC 混合物使表面

关于boc-氨基酸做成酰氯的疑问

问：看了园子里很多帖，有关氨基酸是否可以做成羧基上的酰氯，有人说fmoc保护的还可以，但是手头就只有boc保护的，于是想了下合成方案，望高手指点，就是在低温下（可能冰水中）boc-氨基酸：socl2=1：1（2：1）条件下，用甲苯作溶剂，三乙胺做傅酸剂缓慢滴加来促使boc-氨基酸做成酰氯，希望大家提提意见，是否可行？谢谢。答：请注意，EDC/DCC等不是催化剂，要加化学计量的，不知道“反应效率有限”是指什么意思。做成酰氯可能不容易实现。如果想进一步探讨，请给出反应的结构式、已经尝试过的条件

筛选解离速率优化的scFv

off最低的克隆进行亚克隆、纯化，并用BIAcore进行SRP测定其Kd值。需要注意的是，在scFv情况下，解离曲线形状可以指示出是否存在单个或多个κoff值。有多个κoff值的scFv（当以R1/R0对于作图时，出现一条曲线对一条直线）是单体和二聚体的混合物，最好避免用于续后的研究。用Biacore仪筛选解离速率较低的scFv[器材和试剂]● Biacore SPR仪（Biaeore lnc.）● CM5传感芯片（Biacorelnc.）● Biacore EDC/NHS固化