Cas9 2NLS Nuclease

张峰手稿：基因工程技术之CRISPR-Cas9

functions [ 16 – 18 ]. These studies demonstrated that Cas9 is a RNA-guided nuclease that is capable of binding to a targetDNA and introduce a double strand break in a sequencespecific manner, and its specifi city is determined by sequenceencoded

CRISPR-Cas9 基因敲除 sgRNA 设计好之后

40 个），在 Cas9 切开双链之后，模板的两臂同源序列直接互补（HDR，同源修复），从而完成了基因编辑。聪不聪明！上传一张自己的理解图4. Clonal isolation of cell lines 将已编辑的细胞分离开来这个很好理解，在编辑片段中加入抗生素抗性基因或者荧光基因后，可通过抗生素筛选或者 FACS 分离。5. Functional testing 功能验证（1）SURVEYOR nuclease assay（2）Detection of indels or HDR

CRISPR/Cas9 系统的发现历史和应用

大家都一样， 1）优化密码子，让 Cas9 蛋白可以在哺乳动物系统中很好的表达。 2）加了核定位序列 (NLS)，这样可以把 Cas9 送到细胞核内进行基因组编辑。 3）当然，同时需要表达一个 guide RNA，把 Cas9 定位到靶 DNA 处。 用这个技术，就可以很方便高效廉价地在细胞上做基因编辑：包括敲除、修改、插入。 六、进一步用 Nickase 增加编辑特异