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- 2025年07月09日
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2年
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pET-NLS-Cas9-6×His
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100
- 供应商：
kelei-bio
- 规格：
20μl
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柯雷生物拥有数万种质粒，菌种，基因，细胞株，试剂盒等科研资源，还提供基因合成，质粒改造，载体构建和蛋白表达等精品实验服务
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文献和实验到 Cas9(D10A) 的 N 末端，并将核定位信号 (NLS) 肽添加到 Cas9(D10A) 的 C 末端，构建了 APOBEC1-XTEN-Cas9(D10A) 植物基因组单碱基编辑系统。利用该系统对水稻 NRT1.1B 和 SLR1 进行编辑，结果表明该系统能在靶位点产生预期的 C→T(G→A) 碱基替换，NRT1.1B 和 SLR1 在靶位点产生预期突变的效率分别为 2.7% 和 13.3%。夏兰琴和赵云德合作团队也利用 APOBEC1、Cas9 变体 (nCas9-D10A) 和 UGI
编码区的基因片段，其由5'末端的stat密码子（ATG）和3'末端的终止密码子（TAA，TAG或TGA）结合。然后将目的基因片段插入pMD18-T载体中以构建重组质粒，通过DNA测序鉴定。用指定的酶消化重组pMD18-T质粒，并通过以下方案将检索到的目的DNA片段亚克隆到pET-32α（+）载体中以产生重组表达载体。将约129bp的TBO基因片段插入pET-32α（+）载体（5900bp）用相同的限制酶在37℃消化pET-32α（+）载体和重组pMD18-T载体1小时，然后通过在65℃温育10分钟
生长面积对培养液体积和转染试剂用量进行相应调整。 1、转染前 24 小时，将 293V 细胞以 4-5×106/10 cm 平皿密度接种，加入 10 ml 293V 培养基 37℃，5% CO2 培养。细胞转染前密度应达到 80-90%。 2、漩涡震荡混匀 Polyfect-V 转染试剂。 3、准备 2 个离心管，按以下顺序分别制备质粒和转染试剂稀释液。 离心管 1（质粒 DNA） 离心管 2（转染试剂） Cas9 慢病毒载体 5 μg
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