FITC标记的兔抗长爪沙鼠IgG

双重染色法免疫荧光组织化学染色步骤

FITC标记的B抗体染色，根据两种抗体的动物种属不同，可用直接法也可用间接法，结果A抗原呈现橘红色荧光，而B抗原呈现黄绿色荧光。在应用中，常用的方法是免疫荧光组织化学中间接法和SABC-Cy3法相结合。例如，在实验设计时，选择小鼠抗大鼠A和兔抗大鼠B作为两种不同的特异性一抗，相匹配的二抗分别为FITC-抗小鼠IgG和生物素化―抗兔IgG。进行双重染色时，由于两种一抗种属来源不同，可把一抗混合使用。孵育结束后洗涤未结合的一抗，滴加二抗时，先加人生物素化―抗兔IgG(二抗)孵育，洗涤后，滴加SABC-Cy

免疫荧光双标技术中操作要点和注意事项

对照。 二、注意事项 1、荧光染色后一般在 1h 内完成观察，或于 4℃ 保存 4h ，时间过长，可能会使荧光提前衰退。 2、每次试验均需设置以下三种对照： （1） 阳性对照：阳性血清+荧光标记物； （2）阴性对照：阴性血清+荧光标记物； （3）荧光标记物对照：PBS +荧光标记物。 三、免疫荧光双标的经验之谈 1、选取一抗时，要求来源于两种不同的动物，我用的是来源于家兔和大鼠的抗体，二抗则是不同荧光信号标记的，我用的是 donkey anti-rabbit-FITC（绿）和donkey anti

FACS法检测样品mTNF

（4）         兔抗TNF多克隆抗体 （5）         FITC标记的羊抗兔IgG （6）         圆底96孔细胞培养板，离心机，温浴箱，刻度吸管，毛细吸管，加样器（头），CO2 培养箱，流式细胞液，细胞计数板 【操作步骤】 （1）         将单核/巨噬细胞加或不加激活剂，37℃，5%CO2 培养箱中培养一定时间； （2）         将单核/巨噬细胞悬液以2000r/min离心10min， 弃上清； （3）