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Cfr42I (SacII) (10 U/µL)

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  • 上海谷研
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  • 2025年12月24日
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      上海谷研

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      -20℃

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      详见说明书

    作用及原理:
    ⒈溶液I—溶菌液:
    溶菌酶:它是糖苷水解酶,能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键,因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时,溶菌酶作用受到抑制。
    葡萄糖:增加溶液的粘度,维持渗透压,防止DNA受机械剪切力作用而降解。
    EDTA:(1)螯合Mg2+、Ca2+等金属离子,抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用(DNase作用时需要一定的金属离子作辅基);(2)EDTA的存在,有利于溶菌酶的作用,因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。
    ⒉溶液II-NaOH-SDS液:
    NaOH:核酸在pH大于5,小于9的溶液中,是稳定的。
    但当pH>12或pH<3时,就会引起双链之间氢键的解离而变性。
    Cfr42I (SacII) (10 U/µL)在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1/L,加抽提液时,该系统的pH就高达12.6,因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。
    SDS:SDS是离子型表面活性剂。它主要功能有:
    1)溶解细胞膜上的脂质与蛋白,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。
    2)解聚细胞中的核蛋白。
    3)SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R+-蛋白质的复合物,使蛋白质变性而沉淀下来。但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用,所以在以后的提取过程中,必须把它去除干净,防止在下一步操作中(用RNase去除RNA时)受到干扰。

    产品细节图片1
    根据不同浓度的氯化钠溶液对DNA和蛋白质的溶解度不同原理,可以在提取不同类型DNA使用中加以利用。
    1.Nacl是常用的盐析材料之一,盐析即在高浓度Nacl溶液中,蛋白质析出的现象。原理如下
    1)Nacl溶液与蛋白质争夺水分子,破坏蛋白质胶体颗粒表面的水膜;
    2)Nacl溶液大量中和蛋白质颗粒上的电荷,从而使水中蛋白质颗粒积聚而沉淀析出;
    2.不同浓度下DNA分子构象(三维结构)不同,不同的构象溶解度也不同。
    1)当NaCl溶液的浓度为0.14mol/L时,DNA溶解度最小,因此改变NaCl溶液的浓度既能使DNA溶解也能使其析出;
    2)DNA在不同浓度的氯化钠溶液中随着氯化钠的浓度不断升高;

    产品细节图片2
    3.所以可以使用适当的高浓度Nacl溶液,使得蛋白质析出,而DNA溶解度较大,通过高速离心,取上清并去除沉淀,进而去除蛋白质。
    产品名称:Cfr42I (SacII) (10 U/µL)
    Enzyme:Cfr42I(SacII)

    保存温度:-20℃
    货期:2-3天
    CompatibleBuffer:10xBufferB
    OptimalReactionTemperature:37°C
    SensitivetoHeatInactivation::Yes
    MethylationSensitivity:CpGmethylation-sensitive, Notdammethylation-sensitive, Notdcmmethylation-sensitive
    ThermoScientificCfr42I(SacII)restrictionenzymerecognizesCCGC^GGsitesandcutsbestat37°CinBbuffer(Isoschizomers:KspI,SacII,Sfr303I,SgrBI,SstII).SeeReactionConditionsforRestrictionEnzymesforatableofenzymeactivity,conditionsfordoubledigestion,andheatinactivationforthisandotherrestrictionenzymes.ThermoScientificconventionalrestrictionendonucleasesarealargecollectionofhighqualityrestrictionenzymes,optimizedtoworkinoneofthebuffersoftheFiveBufferSystem.Inaddition,theuniversalTangobufferisprovidedforconvenienceindoubledigestions.Alloftheenzymesexhibit100%activityintherecommendedbufferandreactionconditions.Toensureconsistentperformance,ThermoScientificrestrictionenzymereactionbufferscontainpremixedBSA,whichenhancesthestabilityofmanyenzymesandbindscontaminantsthatmaybepresentinDNApreparations.Features•Superiorquality—stringentqualitycontrolandindustryleadingmanufacturingprocess•Convenientcolor-codedFiveBufferSystem•IncludesuniversalTangobufferfordouble-digestions•BSApremixedinreactionbuffers•WideselectionofrestrictionendonucleasespecificitiesApplications•Molecularcloning•Restrictionsitemapping•Genotyping•Southernblotting•Restrictionfragmentlengthpolymorphism(RFLP)•SNPNote:Cfr42Iactivityisaffectedbyhighsaltconcentration.TraceamountsofsodiumchlorideremaininginthesubstrateDNAaftercompletionofupstreamapplicationsmayinhibitenzymeactivityandresultinimpairedDNAcleavage.CertainsitesinlambdaDNAaredifficulttocleavewithCfr42I,thesameaswithitsprototypeSacII.AtleasttwocopiesofCfr42Irecognitionsitearerequiredforefficientcleavage.Formethylationsensitivity,refertoproductspecifications.
    DNA沉淀剂:
    原则:不与DNA反应,对其无影响。
    1.纯乙醇(二倍体积比);效率高,需要放置的时间短,在公司用Kit提取的时候,没有放置直接进行下一步;确定是价格相对昂贵。
    2.95%乙醇,价格相对于纯乙醇便宜,但是会损失DNA;
    3.异丙醇(0.6倍体积);
    1)普通细胞上清液体,静止15-30min即可沉淀;
    2)对于含量低,或者组织(比如我现在经常提取的小鼠的肝脏中的Total和cccDNA),则最好在-20℃放置2h或者以上,
    本人提取肝脏组织DNA时候,最长时间放置了三天,对结果并无影响;上周提取细胞中cccDNA的时候,室温放置了15min,结果提出的DNA含量也挺高的,而且之后的Southern结果也很成功。我猜测可能是含量高,所以时间短点也可以,但是如果时间不是很着急,还是按照规定的时间来做比较保险。
    以下是公司正在热销的产品:
    改良CCD琼脂基础(mCCD)特价英文:CCDA Base  产品规格:250g  产品用途:用于弯曲杆菌的分离培养(GB标准)  

    Bolton肉汤供应英文:Boltom Broth  产品规格:250g  产品用途:用于空肠弯曲菌的增菌(GB标准)  
    Mueller-Hinton琼脂(MHA)价格英文:Mueller-Hinton Agar  产品规格:250g  产品用途:用于弯曲杆菌的药物敏感性试验  
    1%马尿酸钠价格英文:产品规格:0.4ml/支*20支  产品用途:用于空肠弯曲菌马尿酸钠水解试验  
    Bolton肉汤添加剂供应英文:Boltom Broth Additrive  产品规格:1ml*5支  产品用途:每支添加于100ml  
    头孢菌素纸片(30ug/片)供应英文:Cephalosporin strip  产品规格:10片/瓶  产品用途:用于空肠弯曲菌药敏试验。  
    萘啶酮酸纸片(30ug/片)供应英文:Nalidixic acid strip  产品规格:10片  产品用途:用于空肠弯曲菌药敏试验。  
    改良Camp-BAP氏琼脂添加剂A供应英文:Modified Camp-BAP Agar additive A  产品规格:1ml*5  产品用途:添加于100ml改良Camp-BAP氏琼脂基础中  
    改良Camp-BAP氏琼脂添加剂B供应英文:Modified Camp-BAP Agar additive B  产品规格:1ml*5  产品用途:添加于HB0243中  
    TTC供应英文:TTC  产品规格:10g  产品用途:添加于TTC琼脂基础中  
    波尔顿选择性增菌肉汤添加剂供应英文:Bolton Selective Enrichment broth additive  产品规格:2ml*5  产品用途:每支添加于225mlHB0273中  
    Cfr42I (SacII) (10 U/µL)兔血小板衍生生长因子AB酶联免疫试剂盒

    英文名称:Rabbit PDGF-AB ELISA Kit
    反应性:Rabbit
    样品类型:Serum, plasma, Cell culture supernatant
    检测范围:18-1200 pg/ml
    灵敏度:3 pg/ml
    检测目标:PDGF-AB
    应用:Sandwich ELISA

     

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