PCR封板膜,荧光定量专用，LS-UP20

荧光定量 PCR 异常扩增曲线分析攻略

PCR 预混液跟核酸模板加好后是否混匀，如果没有混匀，特别是样本体积比较大的时候（超过 PCR 体系的 20%），更容易发生 optical mixing 现象。因为样本是水相会在上层，试剂（含有甘油成分）会在下层，在前期的 PCR 过程中不足以混匀完全，这样会形成折射，荧光较强，而一般加热几个循环后样本跟预混液会混匀，荧光就变稳定了（图十）。 图十：样本跟预混液未混匀现象 还有上机的反应体系里尽量不要有大的气泡，有气泡的话，中间容易形成折射，干扰荧光的采集（图十一）。所以实时荧光定量 PCR 实验

99% 的人不知道的 PCR 耗材小机密！

和鉴别，特别是在高通量实验中。尽管塑料的颜色对 DNA 扩增没有影响，但在设置实时荧光定量 PCR 的反应时，与透明耗材相比，我们更推荐使用白色塑料耗材或者经磨砂处理的塑料耗材，以实现灵敏和准确的荧光检测。 qPCR 使用透明和白色耗材的结果比较（A）与透明孔相比，白色孔 Ct 值更低（灵敏度更高）。（B）白色孔在技术重复中也表现出更高的一致性。 白色耗材通过阻止荧光折射出管来提高 qPCR 数据的灵敏度和一致性。折射被最小化时，更多的信号被反射回检测器，从而增加信噪比。此外，白色管壁可阻止荧

荧光定量 PCR——想要实验结果可靠，各种对照不可少

怎么整板都没有扩增曲线，是哪一步实验出问题了吗？ 这个病原体这段时间怎么经常检出？不会是有污染了吧？ 在您看到荧光定量 PCR 结果的时候是否也有过这样的疑问？隐隐约约感觉实验某个步骤出现问题，却又不知该从何下手。别担心，有「对照精灵」们来助您一臂之力。 荧光定量 PCR 实验，从样本采集到结果分析包含多个实验步骤，针对不同的步骤，可以选择不同的对照对流程进行监控（图 1）。 图 1. 实验流程和常见阴阳性对照种类。 阴性对照 荧光定量 PCR 的灵敏度可以达到 1 拷贝/孔，如此高灵敏