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- 2025年08月25日
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深圳子科生物
- 规格：
5ml
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文献和实验或 4℃过夜以捕获免疫沉淀复合物。 离心（3000 rpm，5 min）收集 Agarose 珠子，弃掉上清，用 800 µL-1000µL 预冷的 PBS 缓冲液洗涤珠子 3 次。（小心吸取上清，避免触碰底部珠子） 收集沉淀，加 60 µL 2×SDS 蛋白上样缓冲液中重悬沉淀，轻混均匀后煮沸 5 min，12000 rpm 离心 10 min。 将上清转移至一新离心管，进行 Western 检测。
从小鼠腹水中纯化mcab的方法有盐析、离子交换层析、凝胶过滤和亲合层析等。应用tsk deae-spw离子交换层析柱从小鼠腹水中纯化mcab不仅纯化速度快，回收率和得率高，而且保持良好的生物学活性。一、原理根据离子交换原理，将经硫酸铵粗提的含mcabγ球蛋白上样结合于层析柱上，通过增加洗脱液中的离子强度，洗脱并收集蛋白峰。二、试剂和器材1、tsk deae spw离子交换层析柱（75mm×7.5mm，bio rad）2、高效液相色谱仪（包括控制系统、溶剂传递系统、高压加压活门和紫外280nm
洗脱流速1ml/min 0～1min：0→5%缓冲液B(20mM Tris, PH8.5, 含2.0M醋酸钠) 1～20min(线性梯度洗脱)：5→20%缓冲液B 20～22min：20→0%缓冲液B 洗脱液用紫外280nm进行监测 收集蛋白峰，进行含量、纯度和活性测定 (三) 试剂和器材 1. TSK DEAE SPW离子交换层析 柱(75×7.5mm, Bio Rad
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