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- 2025年07月09日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
59
- 英文名：
4×蛋白上样缓冲液(含DTT)
- CAS号：
详见说明书
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海谷研
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
10ml
| 产品名称 | 4×蛋白上样缓冲液(含DTT)价格 |
| 规格 | 10ml |
| 单位 | 瓶 |
1. 贴壁细胞的消化：
a) 吸去培养液，用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
b) 加入少量胰蛋白酶消化液，盖过细胞即可，室温放置1-2分钟。不同的细胞消化时间有所不同，对于贴壁牢固的细胞可适当延长消化时间。
c) 显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。此时吸除消化液。加入含血清的细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
d) 如果发现消化不足，可加入胰蛋白酶消化液重新消化。
e) 如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2. 组织的消化：
不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
实验室常见故障的处理方法：
1. 螺旋瓶盖太过紧固不易打开：
当螺旋瓶盖拧不开时，可用电吹风或小火焰烘烤瓶盖周围，使其受热膨胀，再用于布包住瓶盖用力将其旋开。
2. 清除仪器上的特殊污垢：
在回流操作或浓缩溶液时，经常会有结晶析出在液面上方的烧瓶内壁上，且附着牢固，不仅不能继续参加反应，有时还会因热稳定性差而逐渐分解变色。
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4×蛋白上样缓冲液(含DTT)价格2,6-二-4-羟基啶 17228-74-9 试剂盒 组装/原装
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4×蛋白上样缓冲液(含DTT)价格操作步骤：
1、 按实验具体要求操作或参考下列革兰氏染色的方法。
2、 涂片：取待检细菌，于载玻片中央涂成薄层或者在载玻片上滴加少许无菌水，取菌与水混合均 匀，涂成薄层。
3、 干燥：涂片后在室温下自然干燥，也可在酒精灯上略加温，使之迅速干燥。
4、 固定：手持载玻片一端，标本面朝上，在酒精灯的火焰外侧快速来回移动。
5、 初染：滴加结晶紫染色液染色，清水冲洗去染色液。
6、 媒染：滴加Gram碘液，并覆盖载玻片室温放置，水洗。
7、脱色：滴加脱色液摇动，直至流下的脱色液不出现紫色为止，立即用水冲去脱色液，终止反应。
8、 复染：滴加沙黄染色液染色，水洗。
9、 干燥。镜检：置油镜观察。 染色结果： 革兰氏阳性菌：蓝色至紫色；革兰氏阴性菌：红色。
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文献和实验系统的负担，导致包涵体的形成。生长温度可能是影响大肠杆菌高度表达目的蛋白的最重要因素。低温培养能在一定程度上抑制包涵体的形成。IPTG 的浓度对表达水平的影响也非常大。所以通过试验确定最佳的培养条件是很必要的。6. 将所有样本室温最高速度离心 1 分钟，弃上清，沉淀重悬于 100 微升 1×SDS 蛋白上样缓冲液中，100℃ 加热 5 分钟，室温最高速度离心 1 分钟，取 15 微升样品上样于 SDS 聚丙烯酰胺凝胶，用 SDS－PAGE 观察表达产物条带，从而确定优化的培养条件。二、大量表达靶蛋白
-PAGE 电泳分析检测结果。这种方法得到的目的蛋白 N是在细胞内与蛋白 M 天然结合的，符合体内实际情况，得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。 步骤 用预冷的 PBS 溶液洗涤贴壁细胞两次（对于悬浮细胞则用台式离心机以 800-1000 rpm 转速通过离心洗涤）。 加入预冷的 RIPA 液（含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂），RIPA 液的用量：按照 0.5 mL 每 5×106 细胞计算。 注：悬浮细胞，收集
我做NF-kB的EMSA实验方法和结果，条带不好，请大家指点！
核蛋白提取： （1）5 millions个离心收集 （2）弃上清，细胞沉淀重悬于1.5ml冰预冷的PBS缓冲液，4℃下2000 rpm离心5min。 （3）弃上清，沉淀重悬于500μl冰预冷的Buffer A离心收集，再悬于0.5 ml Buffer A。 （4）冰上放置10分钟，加入NP40使终浓度为0.5%，混匀后，轻摇20秒。 （5）4℃下1330×g离心15分钟得到细胞核。 （6）重悬于50µl Buffer B，于冰上强烈振荡15分钟，4℃下16300×g离心10分钟
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