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- 2025年12月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
54
- 英文名：
PBR322plasmid
- 保质期：
有效期5年
- 供应商：
上海谷研
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
支
原则：不与DNA反应，对其无影响。
1.纯乙醇（二倍体积比）；效率高，需要放置的时间短，在公司用Kit提取的时候，没有放置直接进行下一步；确定是价格相对昂贵。
2.95%乙醇，价格相对于纯乙醇便宜，但是会损失DNA；
3.异丙醇（0.6倍体积）；
（1）普通细胞上清液体，静止15-30min即可沉淀；
（2）对于含量低，或者组织（比如我现在经常提取的小鼠的肝脏中的Total和cccDNA），则最好在-20℃放置2h或者以上，
本人提取肝脏组织DNA时候，最长时间放置了三天，对结果并无影响；上周提取细胞中cccDNA的时候，室温放置了15min，结果提出的DNA含量也挺高的，而且之后的Southern结果也很成功。我猜测可能是含量高，所以时间短点也可以，但是如果时间不是很着急，还是按照规定的时间来做比较保险。
产品名称：PBR322
英文名称:PBR322plasmid
储存条件:-20℃，有效期5年
单位:支
产品简介：质粒载体pBR322是研究得最多，使用最早且应用最广泛的大肠杆菌质粒载体之一。符号质粒载体pBR322中的“p代表质粒；“BR”代表两位两位研究者Bolivar和Rogigerus姓氏的字首，“322”是实验编号。pBR322是一个人工构建的重要质粒，有万能质粒之称。它是由pSF2124、pMB8及pSC101三个亲本质粒经复杂的重组过程构建而成的。质粒载体pBR322的大小为4361bp，相对分子质量较小的是它第一个优点。优点之二是它带有一个复制起始位点，保证了该质粒只在大肠杆菌的细胞中行使复制的功能。具有氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因两种抗生素抗性基因，可供转化子的选择标记是它的第三个优点。本产品为纯化的PBR322质粒溶于TE缓冲液，可直接用于载体构建、转化等分子克隆实验操作。
作用及原理：
⒈溶液I—溶菌液：
溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。
葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。
EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。
⒉溶液II－NaOH－SDS液：
NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是稳定的。
但当pH＞12或pH＜3时，就会引起双链之间氢键的解离而变性。
PBR322在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1／L，加抽提液时，该系统的pH就高达12.6，因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。
SDS：SDS是离子型表面活性剂。它主要功能有：
（1）溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。
（2）解聚细胞中的核蛋白。
（3）SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R＋-蛋白质的复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取过程中，必须把它去除干净，防止在下一步操作中（用RNase去除RNA时）受到干扰。
根据不同浓度的氯化钠溶液对DNA和蛋白质的溶解度不同原理，可以在提取不同类型DNA使用中加以利用。
1.Nacl是常用的盐析材料之一，盐析即在高浓度Nacl溶液中，蛋白质析出的现象。原理如下
（1）Nacl溶液与蛋白质争夺水分子，破坏蛋白质胶体颗粒表面的水膜；
（2）Nacl溶液大量中和蛋白质颗粒上的电荷，从而使水中蛋白质颗粒积聚而沉淀析出；
2.不同浓度下DNA分子构象（三维结构）不同，不同的构象溶解度也不同。
（1）当NaCl溶液的浓度为0.14mol/L时，DNA溶解度最小，因此改变NaCl溶液的浓度既能使DNA溶解也能使其析出；
（2）DNA在不同浓度的氯化钠溶液中随着氯化钠的浓度不断升高；
3.所以可以使用适当的高浓度Nacl溶液，使得蛋白质析出，而DNA溶解度较大，通过高速离心，取上清并去除沉淀，进而去除蛋白质。
以下是公司正在热销的产品：
SSX2 Polyclonal Antibody资源名称:小鼠垂体瘤细胞英文: SSX2 Polyclonal Antibody 种属 :GT1-1
TACC2 Polyclonal Antibody资源名称:大鼠胶质瘤细胞英文: TACC2 Polyclonal Antibody 种属 :C6
DPYS Polyclonal Antibody资源名称:兔间变表皮鳞癌瘤株英文: DPYS Polyclonal Antibody 种属 :VX2
DHFR Polyclonal Antibody资源名称:人脑胶质瘤细胞英文: DHFR Polyclonal Antibody 种属 :T98G
NEK3 Polyclonal Antibody资源名称:人肺巨细胞癌细胞(高转移)英文: NEK3 Polyclonal Antibody 种属 :95D
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ANKRD54 Polyclonal Antibody资源名称:大鼠脊髓前角运动神经元瘤细胞英文: ANKRD54 Polyclonal Antibody 种属 :VSC4.1
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VPS26A Polyclonal Antibody资源名称:人睾丸精原细胞瘤细胞英文: VPS26A Polyclonal Antibody 种属 :TCAM-2
CSTB Polyclonal Antibody资源名称:人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞英文: CSTB Polyclonal Antibody 种属 :OCI-LY3
ENO3 Polyclonal Antibody资源名称:人喉癌细胞英文: ENO3 Polyclonal Antibody 种属 :Hepa2
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AK2 Polyclonal Antibody资源名称:人B淋巴瘤细胞英文: AK2 Polyclonal Antibody 种属 :Farage
ZNF195 Polyclonal Antibody资源名称:红色荧光蛋白标记人结直肠癌细胞英文: ZNF195 Polyclonal Antibody 种属 :HCT116-RFP
PAK2 Polyclonal Antibody资源名称:肝癌细胞株英文: PAK2 Polyclonal Antibody 种属 :HepG2/TC155
PBR322小鼠淋巴细胞趋化因子elisa检测试剂盒
英文名称:Mouse Lymphotactin ELISA KIT
反应性:Mouse
样品类型:Serum, plasma, Cell culture supernatant
灵敏度:30 pg/ml
检测目标:Lymphotactin
应用:Sandwich ELISA
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文献和实验Back to Basics: pBR322 and Protein Expression Systems in E. coli
plasmid-borne elements and their interaction with the particular host strain will influence the overall expression system and final productivity (3 ) (see Chapters 1 –3 ). Plasmid vector pBR322 (4 ) is a well-established multipurpose cloning
1)，尿嘧啶合成酶基因(URA3)，亮氨酸合成酶基因(LEU2)，组氨酸合成酶基因(HIS4)等。 3) 生化标记基因。这类标记基因的表达产物可催化某些易检测的生化反应，常用的基因有β-半乳苷酶基因（lacZ）、葡萄糖苷酸酶基因（GUS）、氯霉素乙酰转移酶基因（CAT）。 为了进一步说明载体的结构和各个结构的功能，下面举一个在基因工程中使用比较频繁的大肠杆菌载体—pBR322作为例子。 大肠杆菌载体pBR322 载体pBR322是由Bolivar 等人于1977年构建的。该载
都中止。但松弛型质粒仍继续进行复制。因此在增殖松弛型质粒时，总是要让宿主菌经氯霉素处理（在培养液中加入适量的氯霉素）抑制蛋白质的合成。图23-3 pBR322的基本结构（一）大肠杆菌质粒应用的最广泛的质粒载体是pBR322，它属松弛型质粒，有抗氨苄青霉素和抗四环素两个抗性基因可作为标记基因，有许多种常用的限制酶的切点。它全长4352个核苷酸，排列顺序已全部测定，基本结构如图23-3。当需要用pBR322来克隆BamHI酶切的一个DNA片段时，一般的做法是如图23-4所示。图23-4 pBR322克隆
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