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- 2025年12月12日
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37
- 英文名：
Oligo(dT)15Prirner
- 供应商：
上海谷研
- 保存条件：
-20
- 规格：
支
原则：不与DNA反应，对其无影响。
1.纯乙醇（二倍体积比）；效率高，需要放置的时间短，在公司用Kit提取的时候，没有放置直接进行下一步；确定是价格相对昂贵。
2.95%乙醇，价格相对于纯乙醇便宜，但是会损失DNA；
3.异丙醇（0.6倍体积）；
（1）普通细胞上清液体，静止15-30min即可沉淀；
（2）对于含量低，或者组织（比如我现在经常提取的小鼠的肝脏中的Total和cccDNA），则最好在-20℃放置2h或者以上，
本人提取肝脏组织DNA时候，最长时间放置了三天，对结果并无影响；上周提取细胞中cccDNA的时候，室温放置了15min，结果提出的DNA含量也挺高的，而且之后的Southern结果也很成功。我猜测可能是含量高，所以时间短点也可以，但是如果时间不是很着急，还是按照规定的时间来做比较保险。
产品名称：Oligo（dT）15 Primer
别名:Oligo（dT）15Prirner
英文名称:Oligo(dT)15Prirner
储存条件:-20
单位:支
Oligo(dT)说明：分子生物学专用Oligo(dT)Primer和RandomPrimers的区别 1、 Oligo(dT)Primer也可称为寡聚胸腺嘧啶引物，是只有胸腺嘧啶组成的寡居核苷酸链，长度范围在10～20个碱基之间，常用的Oligo(dT)Primer有15碱基、16碱基和18碱基。 Oligo(dT)Primer利用了碱基互补配对的原则以及mRNA含有poly（A）尾巴的特点，巧妙设计而成。由于这个特点，使得Oligo(dT)Primer只能和mRNA配对，并在适宜的条件下完成反转录。原核生物的RNA，真核生物的rRNA和tRNA无poly（A）尾巴，因此用Oligo(dT)Primer作为反转录引物时，这些RNA均不能作为模板。这限制了反转录后获得的总cDNA的数量和种类。另外，若mRNA过长，可能会形成二级结构，这时Oligo(dT)Primer扩增也会有一定的困难。同样提示我们，在反转录时根据需要选择引物。 2、 RandomPrimers即随机引物，常用长度是6碱基或9碱基，它是一种混合体，在每一个位置上四种碱基都可以随机的出现，如AATCGC，TTAAGCG等，如此可以有46或49种组合。 随机引物可以根据碱基情况结合到几乎所有的RNA上，包括mRNA、tRNA和rRNA。因此RandomPrimers适用于mRNA、tRNA和rRNA等所有RNA的反转录反应，适用于长的或具有发卡结构的RNA，对物种没有限制，病毒、细菌、植物、动物等都可使用。 3、目前有的公司和实验室提倡Oligo(dT)和RandomPrimers混合使用，以此保障获得更为完整的cDNA。
作用及原理：
⒈溶液I—溶菌液：
溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。
葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。
EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。
⒉溶液II－NaOH－SDS液：
NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是稳定的。
但当pH＞12或pH＜3时，就会引起双链之间氢键的解离而变性。
Oligo（dT）15 Primer在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1／L，加抽提液时，该系统的pH就高达12.6，因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。
SDS：SDS是离子型表面活性剂。它主要功能有：
（1）溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。
（2）解聚细胞中的核蛋白。
（3）SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R＋-蛋白质的复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取过程中，必须把它去除干净，防止在下一步操作中（用RNase去除RNA时）受到干扰。
根据不同浓度的氯化钠溶液对DNA和蛋白质的溶解度不同原理，可以在提取不同类型DNA使用中加以利用。
1.Nacl是常用的盐析材料之一，盐析即在高浓度Nacl溶液中，蛋白质析出的现象。原理如下
（1）Nacl溶液与蛋白质争夺水分子，破坏蛋白质胶体颗粒表面的水膜；
（2）Nacl溶液大量中和蛋白质颗粒上的电荷，从而使水中蛋白质颗粒积聚而沉淀析出；
2.不同浓度下DNA分子构象（三维结构）不同，不同的构象溶解度也不同。
（1）当NaCl溶液的浓度为0.14mol/L时，DNA溶解度最小，因此改变NaCl溶液的浓度既能使DNA溶解也能使其析出；
（2）DNA在不同浓度的氯化钠溶液中随着氯化钠的浓度不断升高；
3.所以可以使用适当的高浓度Nacl溶液，使得蛋白质析出，而DNA溶解度较大，通过高速离心，取上清并去除沉淀，进而去除蛋白质。
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Oligo（dT）15 Primer小鼠单核细胞趋化蛋白1elisa检测试剂盒
英文名称:Mouse MCP-1 ELISA KIT
反应性:Mouse
样品类型:Serum, plasma, Cell culture supernatant
灵敏度:30 pg/ml
检测目标:MCP-1
应用:Sandwich ELISA
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文献和实验Synthesis of Radiolabeled, Subtracted cDNA Probes Using Oligo(dT) as a Primer
2. To the chilled microfuge tube, add: 0.1 M dithiothreitol 2.5 μl placental RNase inhibitor 200 units oligo(dT)12-18 10 μl 10x reverse transcriptase buffer 25 μl 20 mM solution of dGTP, dATP, and dTTP 10 μl 125 μM dCTP 10 μl 10 mCi/ml
与rRNA，5SRNA,5.8SRNA和tRNA相比，大多数真核生物的mRNA在其3’端带有poly（A）尾巴，因此mRNA能用oligo（dT）-纤维素亲和层析法从细胞总RNA中分离。本文中介绍的方法是利用带有poly（A）尾巴的mRNA能与连在纤维素介质上的短链oligo（dT）形成稳定的RNA-DNA杂合链的原理。poly（A）+RNA能用oligo（dT）层析柱选择洗脱，也能分批洗脱，即批量层析的方法。详情请查看下列pdf文件：“oligo（dT）-纤维素层析法提取po
RT实验Olig（dT）15引物合成的条带明显优于随机引物，不是随机引物的效果较好吗？怎样解释这种现象 网友一回答： Olig（dT）适合于长链甚至全长mRNA的RT，要求RNA必须有Poly A，所以真核生物的mRNA都适用，对RNA样品的质量要求较高，最好不要有明显的DNA污染、RNA降解和RNA断裂。 随机引物 适合各种RNA
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