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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
51
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海博湖
- 规格：
瓶
| 产品名称 | 抗原修复盒 |
| 英文名称 | |
| 货号 | BH-DB6685 |
单位 个
免疫组化实验用耗材。
注意事项：
1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同，应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。
2、虽然作用温和，但能硬化组织，固定时间过久会导致组织变脆，切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过 24 小时。
3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基，使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或 完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露，可造成假阴性的染色，影响免疫组化结果。因此，4%固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时，有时需要对抗原先进行修复，然后才能进行免疫染色等后续操作。
4、本产品对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作
免疫球蛋白：
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操作步骤：
根据使用量，取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF，使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。混匀备用（PMSF 现用现加）。
1、样品前处理：
a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。
c)对于组织样品： 把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
2、后处理：
将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。
温馨提示：
工作液与浓缩液选择的技巧，以及各自的优势。
1，工作液的优势：工作液操作方便，降低实验操作步骤，对于要求无菌的实验，降低染菌风险。
2，浓缩液的优势：浓缩液成本相对较低，实验范围更广，对于不要求无菌的实验，可以进行多种浓度的实验分析以及比较。而且由于浓度高，保存更加稳定。
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文献和实验时样本之间干扰。 Q：说明书上写细胞量为 1~5 × 105 ，细胞量多的话对检测结果有没有影响？ A：建议细胞量最多不要超过 106个，过量的细胞相当于染料被稀释，影响染色和分离效果。一般 2×105 个细胞足够进行凋亡检测了，通常情况下检测 10,000 个细胞就能得到比较好的结果。 Q：是否可以用 PBS 替代凋亡试剂盒里面的 Binding Buffer？ A：不行，Binding Buffer 是必须要加的，Annexin V 与 PS 的结合依赖 Ca2+，Binding
1. 催化特点 ① 高效性 ② 专一性 键专一、基团专一、绝对或几乎绝对专一 ③ 可调节性 酶浓度调节、激素调节、共价修饰调节、限制性蛋白酶的水解作用与酶活调节、抑制剂的调节、反馈调节、金属离子和其他小分子化合物的调节。 2. 影响酶活因素 ①. 酶活测定方式 测定酶活，必须了解酶催化反应总的反应式，而且分析程序必须能够测定底物的消失或产物的生产。还需考虑辅助因子、酶的最适pH值和最适温度。 ②. 酶联测定法 过氧化物酶和它的共底物或辅酶必须过量，使酶联测定不属于限速步骤。 ③ 酶
抗原修复方法 Antigen Retrieval Methods
虽然固定对于保持组织形态至关重要，但该过程也可能对免疫组化/免疫细胞化学检测产生负面影响。固定会改变蛋白质的生化性质，导致目标表位被掩盖，从而无法与一抗结合。表位被掩盖的原因可能是表位内氨基酸的交联、表位附近或位点无关肽段的交联、表位构象的改变或抗原静电荷的改变。抗原修复是指任何能够逆转表位掩盖并恢复表位-抗体结合的技术。 抗原修复技术 抗原修复的必要性取决于多种因素，包括但不限于目标抗原、所用抗体、组织类型以及固定方法和时间。由于多克隆抗体能够识别多个表位，因此与单克隆抗体相比，它们无需抗原修复
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