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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
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47
- 英文名：
Sodium Citrate Antigen Retrieval Solution,50×
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海博湖
- 保存条件：
RT,有效期1年
- 规格：
瓶
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产品名称：柠檬酸钠抗原修复液（50×）
英文名称 Sodium Citrate Antigen Retrieval Solution,50×
储存条件 RT,有效期1年
外观（性状） 液体
单位 瓶
细胞或组织用、甲醛或其它醛类试剂固定后，会导致细胞内抗原形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇，同时蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽，导致免疫染色时染色信号减弱，甚至出现一些假阴性染色结果。所以要求在进行免疫组化染色时，需要先进行抗原修复或暴露，即将固定时分子之间所形成的交联破坏，而恢复抗原的原有空间形态。从而提高抗原的检出率，降低背景染色，提高检测的准确性。
柠檬酸钠抗原修复液(Citrate Antigen Retrieval solution，50×)是一种常用的抗原修复液，可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。可以有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联，充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。
| 产品名称 | 柠檬酸钠抗原修复液（50×） |
| 英文名称 | Sodium Citrate Antigen Retrieval Solution,50× |
| 货号 | BH-DB6641 |
操作步骤：
Ⅰ 实体组织蛋白的提取
1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂， 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。
2． 每100mg固体组织置于培养皿中，手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃匀浆器上下手动匀浆15次，注意低温操作；
3． 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管，离心10000转/分，4℃离心5 min；
4． 取上清转移至新的预冷的离心管中，即为全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
5． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
Ⅱ 培养细胞蛋白提取
1． 贴壁培养的细胞，吸去培养基后，加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次，每次振摇数次以尽量去除培养液；
2． 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞，将细胞及培养液移至离心管中， 1000转/分离心10 min，再用10mL/150mm培养板的冷PBS，1000转/分离心5 min洗两次；
3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂， 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。
4． 细胞洗涤后，转至新的预冷的离心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：
| 细胞数量 | Lysis Buffer加入量 |
| 107个 | 0.5 mL～1 mL |
| 5×106个 | 0.2 mL～0.5 mL |
6． 14,000rpm，4℃离心15min，取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
7． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
固定液的应用：
1．单纯固定液(1)4％中性甲醛固定液：zui常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是，中性甲醛是以pH7 2～7 4的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4％甲醛固定液。此固定液配制后应密封…
1．单纯固定液
(1)4％中性甲醛固定液：zui常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是，中性甲醛是以 pH 7.2～7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4％甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处，保存时间不 超过一个月。
(2)乙醇固定液：使用时以80％～95％的浓度为宜，具有硬化、固定、脱水等作用，对组织渗透力较弱，因此很少单独使用，但其保存组织中的核酸强于中性甲醛，故常用于有核酸操作的实验或检查，如果用于证明尿酸结晶和保存糖原，可用100%乙醇固定组织。
(3)4％的多：主要用于培养细胞的固定。
2．混合固定液
(1)乙醇一甲醛(乙醇－福尔马林，AF)固定液：适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用，固定后的标本可直接入95％乙醇脱水。
(3)Bouin固定液：特别适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀，收缩很少，不会使组织变硬变脆。需现配现用。
(4)Carnoy固定液：穿透能力强，可很好的固定细胞质和细胞核，特别适合于固定外膜致密的组织，亦适用于糖原及尼氏小体的固定。
(5)Zenker固定液：经此液固定的标本，细胞核和细胞质染色颇为清晰，但成本较昂贵且需特殊处理汞。该固定液要避免接触阳光，以免引起化学变化而失效
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文献和实验一、SP 法 1）脱蜡、水化；2）PBS 洗 2～3 次各 5 分钟；3）3% H2O2（80% 甲醇）滴加在 TMA 上，室温静置 10 分钟；4）PBS 洗 2～3 次各 5 分钟；5）抗原修复；6）PBS 洗 2～3 次各5分钟；7）滴加正常山羊血清封闭液,室温 20 分钟。甩去多余液体。8）滴加Ⅰ抗 50μl，室温静置 1 小时或者4℃过夜或者37℃1小时。9）4℃ 过夜后需在37℃复温45分钟。10）PBS 洗 3 次各 5 分钟；11）滴加 Ⅱ 抗 40～50 μl，室温
实验流程：多靶点免疫荧光染色的实验操作与普通单标记免疫组化流程相似。试剂盒中的荧光染料可以在HRP酶的作用下将信号共价结合到抗原上，随后即可衔接下一轮单标染色，直至全部标记完成，即可复染DAPI后封片观察。1.脱蜡水合：1）新鲜二甲苯浸片10min,重复3次。2）梯度乙醇浸片，100% 5min；95% 5min；70% 2min。3）灭菌水洗片1min，重复3次。4）10%中性福尔马林浸片10min，灭菌水洗片1min，重复3次。2.微波修复：1)将脱蜡水合后的玻片置于修复杯中，用抗原修复液
免疫荧光实验步骤 脱蜡至水 二甲苯Ⅰ(8min) 二甲苯Ⅱ(8min) 无水乙醇和二甲苯1:1(5min) 无水乙醇(3min) 95%乙醇(3min) 85%乙醇(3min) 75%乙醇(3min) PBS洗3遍 二．抗原修复 柠檬酸钠抗原修复液修复。 抗原修复100℃ 20min ;自然冷却至室温。 三．PBST洗2遍，PBS洗1遍。每次5min。 四．用30%H2O2和甲醇配制3%的H2O2溶液。每张切片加1滴，室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧
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