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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
46
- 英文名:
Paraformaldehyde,4%
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海博湖
- 保存条件:
-20℃,有效期1年
- 规格:
瓶
产品名称:4%组织细胞固定液
英文名称 Paraformaldehyde,4%
储存条件 -20℃,有效期1年
单位 瓶
产品说明:
(Paraformaldehyde)是免疫组织化学(IHC)和免疫细胞化学(ICC)研究中最常用的固定剂之一。该固定剂较为温和,能很好地保存组织的抗原性和细微结构,适于组织标本和细胞片的较长期保存,非常适合组织和细胞的光镜免疫化学研究。
本产品为4%的PBS溶液,可直接用于组织和细胞固定。若需使用其他低浓度,可使用0.01M PBS按比例稀释。
| 产品名称 | 4%组织细胞固定液 |
| 英文名称 | Paraformaldehyde,4% |
| 货号 | BH-DB6640 |
Ⅰ 实体组织蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂, 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
2. 每100mg固体组织置于培养皿中,手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃匀浆器上下手动匀浆15次,注意低温操作;
3. 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管,离心10000转/分,4℃离心5 min;
4. 取上清转移至新的预冷的离心管中,即为全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
5. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
Ⅱ 培养细胞蛋白提取
1. 贴壁培养的细胞,吸去培养基后,加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次,每次振摇数次以尽量去除培养液;
2. 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞,将细胞及培养液移至离心管中, 1000转/分离心10 min,再用10mL/150mm培养板的冷PBS,1000转/分离心5 min洗两次;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂, 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
4. 细胞洗涤后,转至新的预冷的离心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:
| 细胞数量 | Lysis Buffer加入量 |
| 107个 | 0.5 mL~1 mL |
| 5×106个 | 0.2 mL~0.5 mL |
6. 14,000rpm,4℃离心15min,取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);
7. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
固定液的应用:
1.单纯固定液(1)4%中性甲醛固定液:zui常用的固定液,能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是,中性甲醛是以pH7 2~7 4的磷酸缓冲液为溶剂配制的,其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封…
1.单纯固定液
(1)4%中性甲醛固定液:zui常用的固定液,能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是,中性甲醛是以 pH 7.2~7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的,其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处,保存时间不 超过一个月。
(2)乙醇固定液:使用时以80%~95%的浓度为宜,具有硬化、固定、脱水等作用,对组织渗透力较弱,因此很少单独使用,但其保存组织中的核酸强于中性甲醛,故常用于有核酸操作的实验或检查,如果用于证明尿酸结晶和保存糖原,可用100%乙醇固定组织。
(3)4%的多:主要用于培养细胞的固定。
2.混合固定液
(1)乙醇一甲醛(乙醇-福尔马林,AF)固定液:适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用,固定后的标本可直接入95%乙醇脱水。
(3)Bouin固定液:特别适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀,收缩很少,不会使组织变硬变脆。需现配现用。
(4)Carnoy固定液:穿透能力强,可很好的固定细胞质和细胞核,特别适合于固定外膜致密的组织,亦适用于糖原及尼氏小体的固定。
(5)Zenker固定液:经此液固定的标本,细胞核和细胞质染色颇为清晰,但成本较昂贵且需特殊处理汞。该固定液要避免接触阳光,以免引起化学变化而失效
以下是4%组织细胞固定液的相关产品:
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麦芽队照药材Maltconolmedicine1g
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TrypticSoyAgar
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文献和实验或终止内源性或外源性细胞内分解酶的反应,防止组织细胞自溶,更是为了保存组织或细胞内的抗原性,使抗原不失活,不发生弥散。不同的抗原对固定液耐受程度不同,因而要选择合适的固定剂。 现在常用的固定剂有中性甲醛液,4% 多聚甲醛-磷酸盐缓冲液。有些固定剂对特殊组织有更好效果,如苦味酸对于头皮、指甲固定有软化效果,Helly 固定液对于胰岛和垂体效果较好,PLP 固定液对于含糖组织抗原保存更好。 脱水、石蜡包埋和制片 脱水用梯度乙醇(由低到高)充分脱水,对于一些易脆的组织(如肝、脾等)应减少高浓度酒精里
FITC 标记凝集素的组织化学染色程序1.组织切片经脱蜡处理,若是Bouin液固定的组织,用70%乙醇洗3次除去组织切片内的黄色后,再用蒸馏水漂洗;2.PBS漂洗(含1%牛血清白蛋白)2次,每次5分钟;3.加入FITC-凝集素(PBS适当稀释),置湿盒内孵育,室温1小时;4.PBS漂洗3次,每次5分钟;5.水溶性封片剂封片,荧光显微镜观察。6.结果 FITC标记的凝集素能直接与组织细胞内的糖基结合,从而显示糖基的位置,可用于检测组织细胞中的糖成分,阳性部位呈黄绿色荧光。7.注意
95%乙醇脱水性强,易引起组织收缩、变硬,影响切片质量,因而固定时间不宜过长(2小时内)。乙醇使蛋白变性程度轻,固定后蛋白可再溶解,在染色中孵育时间长的情况下,抗原可流失,并减弱反应强度。 5.乙醚(或三氯甲烷) 与乙醇等量混合对组织穿透性极强,即使涂片上含较多的黏液,固定效果仍较好,是理想的细胞固定液。 培养细胞固定之后晾干可使细胞牢固地黏附在载玻片上,故对于容易脱落的细胞应延长晾干时间。晾干之后PBS漂洗3次,然后进行组织化学或免疫组织化学染色。 用于免疫
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