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- BH-DB6563
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- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
49
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海博湖
- 保存条件：
4℃避光保存有效期一般1年
- 规格：
瓶
产品参数：
| 产品名称 | 40%制胶液（19:1） |
| 英文名称 | |
| 货号 | BH-DB6563 |
英文名称
储存条件 4℃避光保存有效期一般1年
单位 瓶
注意事项：
1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同，应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。
2、虽然作用温和，但能硬化组织，固定时间过久会导致组织变脆，切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过 24 小时。
3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基，使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或 完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露，可造成假阴性的染色，影响免疫组化结果。因此，4%固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时，有时需要对抗原先进行修复，然后才能进行免疫染色等后续操作。
4、本产品对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作
操作步骤：
根据使用量，取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF，使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。混匀备用（PMSF 现用现加）。
1、样品前处理：
a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。
c)对于组织样品： 把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
2、后处理：
将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。
温馨提示：
工作液与浓缩液选择的技巧，以及各自的优势。
1，工作液的优势：工作液操作方便，降低实验操作步骤，对于要求无菌的实验，降低染菌风险。
2，浓缩液的优势：浓缩液成本相对较低，实验范围更广，对于不要求无菌的实验，可以进行多种浓度的实验分析以及比较。而且由于浓度高，保存更加稳定。
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文献和实验×100 ×40 ?g/ml = 840 ?g/ml 或 0.84 ?g/?l取5ul用来测量以后，剩余样品RNA为35 ?l，剩余RNA总量为：35 ?l × 0.84 ?g/?l = 29.4 ?g②纯度检测RNA溶液的A260/A280的比值即为RNA纯度，比值范围1.8到2.1。2）变性琼脂糖凝胶电泳测定①制胶1g琼脂糖溶于72ml水中，冷却至60℃，10 ml的10× MOPS电泳缓冲液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)。10×MOPS电泳缓冲液浓度 成分0.4M MOPS
： 1、实验准备 提取蛋白所需的研磨器材，以及制胶的玻璃板、梳子要清洗干净; 若长期不使用，建议器材在实验前再行清洗一次以杜绝相应的污染。 2、提取蛋白 选择合适的蛋白裂解液，充分去除一些干扰因素，比如核酸，多糖，脂类等; 建议蛋白在测量浓度后变性分装保存，避免反复冻融使蛋白发生降解; 注意 Loading buffer 在保质期内，蛋白加入 Loading buffer 后充分混匀，再煮沸变性。 3、制胶 玻璃板夹紧之后，有些人习惯性加水试一下是否漏胶，建议
/bisacrylamide （40%，w/v） 2毫升80% 甘油 625微升10% 过硫酸铵 （ammonium persulfate） 150微升TEMED 10微升（3） 按照上述次序加入各个溶液，加入TEMED前先混匀，加入TEMED后立即混匀，并马上加入到制胶的模具中。避免产生气泡， 并加上梳齿。如果发现非常容易形成气泡，可以把一块制胶的玻璃板进行硅烷化处理。4. EMSA结合反应： （1） 如下设置EMSA结合反应（预期的结果参见图1）： （2） 按照上述顺序依次加入各种试剂，在加入标记好的探针
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