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- BH-DB6562
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- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
48
- 英文名：
Protein Marker(43kD-200kD)
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海博湖
- 保存条件：
-20℃，有效期1年
- 规格：
瓶
| 产品名称 | 次高分子量蛋白质Marker(43-200kDa) |
| 英文名称 | |
| 货号 | BH-DB6562 |
别名 Protein Marker(43kD-200kD)
储存条件 -20℃，有效期1年
本产品包含5种蛋白质混合物，分子量范围为43kD-200kD，条带分别为：43，66.2，97.4，130，200。经过SDSPAGE电泳，用考马斯亮蓝染色后可以得到分布均匀密度相近的5条带。可以用来判断SDS-PAGE电泳后蛋白质的分子量。-20℃可保存至少六个月。避免反复冻融，建议分装后于-20℃保存。
使用说明：
1.开封后，可根据需要分装成小管，建议每管分装10μl，-20℃贮存，每次取一管使用。
2.本产品已经含有了上样缓冲液，使用前取分装后的小管65℃预热5分钟即可上样进行电泳，上样量5-10μl。
3.建议分离胶浓度为8%。
注意事项：
1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同，应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。
2、虽然作用温和，但能硬化组织，固定时间过久会导致组织变脆，切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过 24 小时。
3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基，使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或 完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露，可造成假阴性的染色，影响免疫组化结果。因此，4%固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时，有时需要对抗原先进行修复，然后才能进行免疫染色等后续操作。
4、本产品对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作
免疫球蛋白：
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操作步骤：
根据使用量，取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF，使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。混匀备用（PMSF 现用现加）。
1、样品前处理：
a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。
c)对于组织样品： 把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
2、后处理：
将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。
温馨提示：
工作液与浓缩液选择的技巧，以及各自的优势。
1，工作液的优势：工作液操作方便，降低实验操作步骤，对于要求无菌的实验，降低染菌风险。
2，浓缩液的优势：浓缩液成本相对较低，实验范围更广，对于不要求无菌的实验，可以进行多种浓度的实验分析以及比较。而且由于浓度高，保存更加稳定。
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文献和实验三明治没夹紧，转膜后拿出来一看，marker都变得七扭八歪。但是有前辈说垫的海绵太厚可能将胶压断，没经历过，不知道是不是会有这种情况。 蛋白来源：肿瘤细胞 蛋白名称（可保密）：磷酸化蛋白 蛋白分子量：10-200 KDa WB用膜类型、孔径
相关专题 蛋白Marker可分为：一、未预染的Marker即宽分子 量蛋白标准、高分子量蛋白标准以及低分子量蛋白标准;二、预染的Marker即单色预染和多色预染。 在western blot 过程中，分子量Marker就像个螺丝钉一样没虽然是个小细节，然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。这个 Western Blot参照家族的一员的作用主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小，只有标准量
。我们推荐按照制造商的说明进行操作。应使用还原型凝胶，除非抗体数据表中推荐使用非还原性条件。凝胶百分比取决于蛋白质的大小：4～40 kDa12～45 kDa10～70 kDa15～100 kDa25～200 kDa20%15%12.5%10%8%四、将蛋白质从凝胶转移到膜上如下制备转移堆叠体：膜可以是硝酸纤维素或 PVDF，两者各具优点。用甲醇「活化」PVDF 1 分钟，并在制备堆叠体之前用转膜缓冲液冲洗 PVDF。可能需要对时间和电压进行一些优化。我们推荐按照制造商的说明进行操作。可在封闭步骤之前
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