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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
42
- 英文名:
Bis-Acr
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海博湖
- 保存条件:
RT
- 规格:
瓶
| 产品名称 | Bis-Acr制胶试剂 |
| 英文名称 | Bis-Acr |
| 货号 | BH-DB6556 |
有效期 2年
级别 Ultra Pure Grade
溶解性 100mg/ml in Water
英文名称 Bis-Acr
CAS 110-26-9
分子式 C7H10N2O2
分子量 154.17
储存条件 RT
纯度 Purity ≥99%
外观(性状) 白色粉末
生物高分子化合物(蛋白质、多肽、核酸)的分离;制备聚凝胶的交联剂
注意事项:
1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同,应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。
2、虽然作用温和,但能硬化组织,固定时间过久会导致组织变脆,切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过 24 小时。
3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基,使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或 完全掩盖某些抗原决定簇,使之不能充分暴露,可造成假阴性的染色,影响免疫组化结果。因此,4%固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时,有时需要对抗原先进行修复,然后才能进行免疫染色等后续操作。
4、本产品对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作
免疫球蛋白:
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Bis-Acr制胶试剂LactoseSulfiteMedium(LS)
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KorserCitrateSodiumBroth
操作步骤:
根据使用量,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。混匀备用(PMSF 现用现加)。
1、样品前处理:
a)对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/管,然后再裂解。
c)对于组织样品: 把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
2、后处理:
将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。
温馨提示:
工作液与浓缩液选择的技巧,以及各自的优势。
1,工作液的优势:工作液操作方便,降低实验操作步骤,对于要求无菌的实验,降低染菌风险。
2,浓缩液的优势:浓缩液成本相对较低,实验范围更广,对于不要求无菌的实验,可以进行多种浓度的实验分析以及比较。而且由于浓度高,保存更加稳定。
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文献和实验放冰箱中一般可保存1~2 月,3 号贮液只能保存一周。如有不溶物要过滤。 表中 试剂 :Acr——丙烯酰胺:Bis——亚甲基双丙烯酰胺;TEMED——四甲基乙二胺;Tris——三羟甲基氨基甲烷。
ml,置棕色瓶,4℃贮存。 ② 分离胶贮液:28%Arc-0.735%Bis储液:丙烯酰胺(Acr)28.0g,甲叉双丙烯酰胺(Bis)0.735g,加重蒸水使其溶解后定容至100ml。过滤后置棕色试剂瓶中,4℃ 贮存,一般可放置1个月左右。 ③ 分析纯过硫酸胺(AP)(AR) 0.14g加重蒸水至100ml,置棕色瓶,4℃储存仅能用一周,最好当天配制。上述3种试剂用于制备分离胶。 ④ 浓缩胶缓冲液:称取1mol/L HCl 48ml,Tris5.98g
离心机2.试剂( 1 ) 2%琼脂2g 琼脂加电极缓冲液100ml,水浴中溶化。( 2)电极缓冲液Tris 6g ,Gly28.8g ,SDS 2g ,去离子水溶解后,用HCl调pH值至8.3,水定容至2000ml 。( 3 ) 30% Aer Acr 30g,水溶后定容至100ml,过滤,冰箱中贮存备用。( 4 ) 1% Bis Bis 1g ,水溶后定容至100ml,过滤,冰箱中贮存。( 5)分离胶缓冲液(1.5mol/L Tris,pH8.7)Ths 15.17g,适量水溶解,然后用lmol/L
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