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文献和实验位。 IF(免疫荧光检测)是采用荧光素标记物作为探针,形成的抗原抗体复合物上带有荧光素,在荧光显微镜下,受激发光的照射后发出一定波长的荧光,从而对细胞、组织中的抗原进行定位或定量。 表 1 IHC/ICC与IF特点对比 IHC/ICC 与 IF 染色中使用的抗体主要为一抗与二抗,根据是否选用二抗以及二抗标记物类型可形成多种不同的检测系统。信号放大是免疫组化实验中的重要步骤,信号放大可以使目标蛋白质的信号从微弱到明显,从而更容易被观察和定量。现有的信号放大技术多为链霉亲和素-生物素法,该方法基于链酶亲和
保护抗原和固定组织作用,过氧化氢孵育时间过长易引起脱片;现用现配,配好后4 ℃避光保存。不过,现在已有"第二代即用型免疫组化试剂盒"避免内源性生物素的干扰,推荐使用。 7)血清封闭 组织切片上有剩余的位点可以与一抗非特异性结合,造成后续结果的假阳性;封闭血清一般是和二抗同一来源的,血清中动物自身的抗体,预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合;也可以用小牛血清、BSA、羊血清等,但不能与一抗来源一致。一般室温 10-30 min。但也要防止封闭过度 8)一抗和二抗
与其他免疫组化染色基本相似,有良好的可操作性。尽管SABC法操作简便,敏感性强,但是,在操作中仍然要遵循一定的原则,才能得到可信度高的结果。我所做的是《……》(题目略去,是2003年获国家自然科学基金专项基金项目,批准号:302400**)的动物实验部分。其中,需要利用抗β1-integrin观察深Ⅱ度烫伤大鼠局部在微电流治疗后β1-integrin的分布情况。应用的方法就是SABC法,试剂盒(即用型)来自博士德公司(不是为该公司做广告)。下面就按照实验步骤,谈一下我的一些体会。1、载玻片防脱片剂处理
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