- ¥780
- HAKATA
- H-W-10
- 上海
- 2025年12月15日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
现货
- 英文名：
Cell Freezing Medium
- CAS号：
H-W-50
- 保质期：
3年
- 供应商：
蒂科生物
- 保存条件：
-20°C
- 规格：
100ml
HAKATA 无血清细胞冻存液
Cell Freezing Medium
货号：Cat No:H-W-50/100
产品介绍
HAKATA无血清细胞冻存液是HAKATA团队在长时间细胞培养研究中不断优化得出的通用型无血清细胞冻存液。HAKATA无血清细胞冻存液可降低细胞在冻存过程中冰晶的产生，提高细胞活力和复苏率。与传统冻存液相比，冻存程序简单，用冻存液重悬细胞后可直接置于-80℃冻存，且可在-80℃长期保存（>5 年）。本产品化学成分明确，不含异源蛋白保证冻存细胞的安全。本产品不仅适用于绝大部分动物细胞系，同样适用于间充质干细胞内皮细胞等原代细胞。本产品仅用于科研用途，不可用于其他用途。
产品特色
- 使用方便，无需额外添加成分。
- 无需程序性降温，减少冻存时花费的精力和成本。
- 安全性高，微生物污染概率小，对细胞正常生长分化无影响。
- 保护细胞，增强细胞活力，复苏率可达90%以上。
- 适用于包括干细胞在内的各类哺乳动物细胞冻存。
操作步骤
细胞冻存步骤
- HAKATA细胞冻存液预冷至4℃，需要添加时再取出。
- 收集对数生长期的贴壁细胞或悬浮细胞于离心管中并计数。
- 根据所需冻存细胞数量确定所需细胞悬浮液数量。
- 将所需数目的细胞悬浮液置于离心管中，1000r/min，离心5 分钟，小心弃去上清液，收集培养细胞沉淀。
- 加入适量预冷的HAKATA 无血清细胞冻存液于离心管中，使细胞浓度约为 5×105-2×106/ml。轻轻地 吹打细胞，使细胞混匀。
- 将离心管中的细胞混合液分装于已标记的冻存管中，建议每管 0.5-1.5ml。
- 将细胞冻存管尽快置于-80℃超低温冰箱中，可较长期冷冻保存。
- 若需液氮中长期保存，需先在-80℃冰箱过夜，再移至液氮罐中保存。
冻存细胞复苏步骤
- 从冰箱中取出冻存的细胞，立即放入 37℃水浴锅中快速解冻。
- 待冻存管中细胞混合液完全融化后，转移至离心管，使用移液管缓慢加入5ml新鲜培养基到细胞沉淀，轻轻吹打混匀。
- 1000r/min离心5min，小心弃去上清，再加入新鲜培养基，轻轻吹打混匀，转移至培养瓶或培养皿中。
保存条件
常温运输，经常使用可放在4℃保存，长期储存需放在-20℃，有效期 36 月。
质量保障
HAKATA细胞冻存液已经过本公司的性能测试，并通过了包括无菌检测（细菌真菌支原体检测）；pH检测；渗透压检测；内毒素检测。
引用文献
Li H, Huang X, Chang X, et al. S100‐ A9 protein in exosomes derived from follicular fluid promotes inflammation via activation of NF‐κB pathway in polycystic
ovary syndrome. J Cell Mol Med. 2019;00:1–12. https://doi. org/10.1111/jcmm.14642
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文献和实验一段时间的生长后收集细胞上清液。但是这两种方法都会存在一定的不足的，去外泌体血清难以做到 100% 的去除的，因此即使 1% 的血清外泌体残留也带来大量的异源外泌体，而外泌体专用无血清培养基，也不是适合所有的细胞，常见的肿瘤细胞培养通常都可以维持生长，而那些血清培养都困难的细胞就难以通用了，所以也需要一些预实验的摸索。 还有，那些 DMEM、1640、F12 的基础培养基是否可以替代血清或者外泌体专用无血清培养基呢？这样是不行的。因为细胞在这些基础培养基的环境下，是处于饥饿状态的，细胞会将培养
pH至7.7，过滤除菌分装，然后-20℃保存备用。EDTA液配方（0.2% 1000ml）EDTA（versene） 2 gNaCl 8gKCl 0.2gNa2HPO4（12H2O） 2.9gKH2PO 40.2g以上药物同样充分溶解后，加新鲜的三蒸水至1000 ml，分装然后高压15磅30分钟灭菌，最后4℃保存备用。细胞冻存液：小牛血清90℅与二甲基亚砜（DMSO）10℅混合；-20℃冰箱保存备用。或小牛血清30℅，1640培养液60℅，DMSO10℅混合； - 20℃冰箱保存备用。
培养 24 - 48 h，细胞汇合度达到 80% - 95% 左右时收取上清，该上清液即可用于提取外泌体。 使用外泌体专用无血清培养基： 待细胞汇合度~50%时，移去原有完全培养基，添加新培养基进行培养，新培养基由 50% 外泌体专用无血清培养基 + 50% 完全培养基组成； 待细胞生长汇合度约为70-80%时，移去培养基； 使用1×PBS溶液将细胞润洗2-3次； 加入外泌体专用无血清培养基继续培养24 - 48 h，待细胞汇合度到 80% - 95% 时收取细胞培养上清液，该上清液即可用于外泌
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