SDS裂解液（无抑制剂）

献给初学者：手把手教你做免疫共沉淀实验

降解测序。 五、注意事项 细胞裂解采用温和的裂解条件，不能破坏细胞内存在的所有蛋白质－蛋白质相互作用，多采用非离子变性剂（NP40 或 Triton X-100）。每种细胞的裂解条件是不一样的，通过经验确定。不能用高浓度的变性剂（0.2％ SDS），细胞裂解液中要加各种酶抑制剂，如商品化的 cocktailer。 使用明确的抗体，可以将几种抗体共同使用。 使用对照抗体： ① 单克隆抗体：正常小鼠的 IgG 或另一类单抗 ② 兔多克隆抗体：正常兔

免疫共沉淀实验指南

原理 免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是利用抗原和抗体的特异性结合以及 Protein A 或 G 特异性地结合到抗体的Fc 片段的现象探测两个蛋白分子间是否存在相互作用的一种方法。在细胞裂解液中加入针对蛋白M的抗体，孵育后再加入Protein A 或 G 预处理的 Sepharose 珠，若细胞中有与蛋白M结合的蛋白 N，就可以形成这样一种复合物：“蛋白 N-蛋白M—抗蛋白 M 抗体—Protein A 或 G—Sepharose 珠”，经 SDS

一篇搞定 IP、co-IP 实验

，比如 RIPA，虽然裂解剧烈，但是无法维持蛋白天然构象，会破坏互作蛋白对。 如果自配，建议采用温和系统，比如 NP40/Triton 0.1%-1%；SDS ≤0.1%，盐离子≤150 mM 记得要加蛋白酶和/或磷酸酶抑制剂 结合液---利于蛋白之间的相互结合，要考虑孵育（结合）顺序 如果抗体和 beads 先孵育，建议 选择 pH 8.2（更常用）或者 pH 5.0 如果选用纯抗原作为诱饵蛋白 X 去拉裂解液中的靶蛋白 Y，抗体和抗原的结合 buffer 选择中性PBS/TBS 如果诱饵蛋白 X