蒲黄LAMP鉴定试剂盒

蒲黄LAMP鉴定试剂盒原理是由一对引物介导，能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增，经过n个热循环扩增，扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0＜E＜1,扩增效率＝倍，使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
特异性强
　 PCR反应的特异性决定因素为：
　 ①引物与模板DNA特异正确的结合；
　 ②碱基配对原则；
　 ③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；
? ④靶基因的特异性与保守性。
参数规格：
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
实验步骤：
典型的PCR由
（1）高温变性模板；
（2）引物与模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是：
将待扩增的模板DNA置高温下（通常为93℃-94℃）使其变性解成单链；
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短；
耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板从5’→3’方向延伸，合成DNA的新互补链。
具有下列特点：
1.根据 指标的保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。
2.灵敏度比常规 PCR 高 2-3 个数量级，可以达到几百拷贝/反应。
3.即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。
4.一管式荧光定量 PCR 检测，避免后续污染。
5.本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6.本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

蒲黄LAMP鉴定试剂盒注意事项：
1. 建议使用新鲜采取的动物组织，若为长期冷冻组织，应尽量避免反复冻融，否则会导致模板的降解，影响PCR效率。
2. 试剂Buffer AL若低温保存，易产生沉淀。在使用前务必将其在室温中放置一段时间，也可在37℃水浴中预热10 min，以溶解沉淀，混匀后再使用。
3. 电泳检测时，切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否则，电泳时会在泳道中出现一大团拖尾亮带，影响实验结果。
4. 建议扩增片段长度1 kb以内，以便扩增效率佳。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

使用方法：
一、稀释PCR阳性对照（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
2. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8. 如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号（浓度为1×10E4 拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝）或第5号（浓度为1×10E5 拷贝/μL，10μL相当于10万拷贝）再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品，则PC和NC的体积也必须是200μL。
9. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。
蒲黄LAMP鉴定试剂盒三、设置qPCR反应（20 μL体系，在样品制备室进行）
10. 如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复，则反应设置数量相应增加2或3倍。
11. 产品仅用于科研在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加）。多粘菌素B      进口、国产    用1ml无菌水溶解后添加于100ml HB0256中    Polymyxin B    1.2mg/支*5
多价蛋白胨-酵母膏 (PY) 培养基        进口、国产    用于产气荚膜梭菌的培养(SN标准)    Poly Peptone Yeast Extract Medium    250
疱肉培养基基础       进口、国产    加入牛肉粒,用于肉毒梭菌及厌氧梭状芽孢杆菌的检验(GB标准)    Cooked Meat Medium Base    250
疱肉牛肉粒       进口、国产    加入疱肉基础中，配成疱肉培养基    Dried Meat Particle    100
卵黄琼脂培养基基础        进口、国产    用于肉毒梭菌、产气荚膜梭菌的分离培养（GB标准）    Egg Yolk Agar Base    250
含铁牛奶培养基    进口、国产    用于产气荚膜梭菌的牛奶发酵试验        250
梭菌鉴别琼脂(DCA)    进口、国产    用于干燥食品的计数和培养(MERCK方法)    Differentia Clostridial Agar    250
强化梭菌鉴别琼脂(DRCA)    进口、国产    用于食品和其它物质中梭菌的计数和培养(MERCK方法)    Differentia Reinforced Clostridial Agar    250
强化梭菌琼脂    进口、国产    用于梭菌的分离培养(MERCK方法)    Reinforced Clostridium Agar    250
强化梭菌培养基(RCM)    进口、国产    用于梭菌的分离培养(Merck方法)    Reinforced Clostridium Medium    250
TSN 琼脂    进口、国产    用于产气荚膜梭菌的平板计数(Merck方法)    TSN Agar    250
TBB 培养基    进口、国产    用于乳酪产品中梭菌的计数(Merck方法)    Tyrobutyricum Broth Base    250
CHO培养基基础    进口、国产    用于厌氧菌的糖生化反应(Acumedia 方法)    CHO Medium Base    250
SCHAEDLER 琼脂    进口、国产    用于厌氧菌的分离培养(Acumedia 方法)    SCHAEDLER AGAR    250
WILKINS-CHALGREN琼脂    进口、国产    用于厌氧菌的分离培养(Acumedia 方法)    WILKINS-CHALGREN AGAR    250
MCP琼脂    进口、国产    用于产气荚膜梭菌的计数和培养(Acumedia 方法)    MCP Agar    250