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- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
57
- 英文名：
Mycoplasma Detection Kit
- 保质期：
有效期一年
- 供应商：
上海莼试
- 保存条件：
-20℃避光保存
- 规格：
详见说明书
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。
中文名称：支原体检测试剂盒
英文名称：Mycoplasma Detection Kit
产品规格：100T200T
发货周期：1～3天
本试剂盒是利用荧光染料检测支原体污染。这种染料会结合到DNA的AT富集区域，因为支原体的DNA中AT含量高(55％～80％)，所以可将其染色而被检测到。被支原体污染的细胞经染色后在细胞周围可看到许多大小均一的荧光小点，即为支原体的DNA染色斑，说明有支原体污染。Hoechst 33258的最大激发波长为346nm，最大发射波长为460nm;Hoechst 33258和双链DNA结合后，最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。
操作步骤：
贴壁细胞：
1.被检细胞接种于无菌的6孔细胞培养板中，接种密度为12×104。同时，接种正常无支原体感染的同种细胞，作为阴性对照。
2.5天后，先吸去培养液，再加入1ml的固定液，静置20min，
3.吸去固定液，晾干。
4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液须覆盖全部被检细胞)，37℃避光放置1520min或室温静置20～30min。
5.吸去Hoechst 33258工作液，加入2ml灭菌超纯水洗涤三次，直接风干。风干后加入一滴封片液，并以盖玻片覆盖。
6.荧光显微镜观察。用紫外激发光激发，观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。
悬浮细胞：
1.收集需检测的细胞，1500rpm，5min。
2.将收集的细胞涂片于载玻片上，再加1ml的固定液，静置20min。
3.吸去固定液，晾干。
4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液须覆盖全部被检细胞)，37℃避光放置15～20min或室温静置20～30min。
5.吸去Hoechst 33258工作液，用无菌水洗涤玻片3次，直接风干。风干后加入一滴封固液，并以盖玻片覆盖。
6.荧光显微镜观察。用紫外激发光激发，观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。
注意事项：
支原体检测试剂盒尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
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文献和实验时样本之间干扰。 Q：说明书上写细胞量为 1~5 × 105 ，细胞量多的话对检测结果有没有影响？ A：建议细胞量最多不要超过 106个，过量的细胞相当于染料被稀释，影响染色和分离效果。一般 2×105 个细胞足够进行凋亡检测了，通常情况下检测 10,000 个细胞就能得到比较好的结果。 Q：是否可以用 PBS 替代凋亡试剂盒里面的 Binding Buffer？ A：不行，Binding Buffer 是必须要加的，Annexin V 与 PS 的结合依赖 Ca2+，Binding
化作用——氧分子、过氧化氢、氧自由基 5. 表面活性剂和去污剂 6.变性剂——脲和盐酸胍、高浓度盐、螯合、有机溶剂 7. 重金属离子和巯基试剂 8. 热 9. 机械力 10. 冷冻和脱水 11. 辐射 5. 酶活计算 ① 酶活定义 酶的活力单位：酶的1个活力单位是在该酶的最适条件下，在25℃、1 min内催 1μmol的底物转化为产物的酶量。 ② 定时法的计算 将酶与底物在特定条件下孵育，酶促反应开始进行，经过一定时间后，用终止液终止反应，通过化学或生物化学的方法测出底物或产物的总变化量，除以时间即可
针对同一指标，生化试剂盒和 ELISA 试剂盒的检测结果趋势是一致的吗？
一、两种方法检测原理 两种方法的基本原理都是朗伯-比尔定律，但是具体形成过程和检测的方法不一样的。 1) 生化试剂盒检测原理 生化试剂盒检测的本质就是某物质化学变化的显色反应，其反应过程可以划分为四个区：延迟区、等速区、过渡区和平衡区，以时间为横坐标、吸光度为纵坐标作图，如下所示： 延迟区：无规律可寻。 等速区：对应的是速率法，一般应用于酶活力的检测。 过渡区：对应的是固定时间法，目的是解决某些化学反应的非特异性问题，提高准确度。 平衡区：对应的是终点法，主要是测定某物质在样本中的含量。 目前
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