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- 2025年12月20日
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澳音生物
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免疫印迹Western blot
Western Blot是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过凝胶电泳分离细胞或者组织样本中的蛋白，经转膜、封闭后目标蛋白与特有性一抗结合，再与辣根过氧化物酶（HRP）标记的第二抗体起反应，经过底物显色，分析曝光条带的位置和灰度分析获知目标蛋白在样本中的表达情况（见图4.4）。该法结合了凝胶电泳和固相免疫测定两种技术的高特异性和高敏感性，可以对目标蛋白进行定型和半定量的分析
技术应用：
通过抗原抗体反应对目标蛋白的表达进行半定量检测，还可用于蛋白-蛋白、蛋白-DNA和蛋白-RNA相互作用的后续分析。WB作为一种方便可靠的研究工具，将与谱和蛋白质芯片等技术一起在蛋白质组时代发挥重要作用。
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文献和实验Western Blot Workflow（免疫印迹解决手册）
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杂交膜的选择是决定 Western blot成败的重要环节。应根据杂交方案、被转 移蛋白的特性以及分子大小等因素，选择合适材质、孔径和规格的杂交膜。用于Western blot的膜主要有两种：硝酸纤维素膜(NC) 和 PVDF 膜。NC 膜是蛋白印迹实验的标准固相支持物，在低离子转移缓冲液的环境下，大多数带负电荷的蛋白质会与膜发生疏水作用而高亲和力的结合在一起， 但在非离子型的去污剂作用 下，结合的蛋白还可以被洗脱下来。根据被转移的蛋白分子量大小，选择不同孔 径的 NC 膜。因为随着膜孔径的不断
1．简介 Western Blot中文一般称为蛋白质印迹。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。 2．原理 Western Blot与Southern印迹杂交或Northern印迹杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳 ，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗
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