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- 联迈生物
- LM-43018-1
- 中国/上海
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
无酶细胞消化液
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海联迈生物工程有限公司
- 保存条件：
2-8℃避光保存。长期保存于-20℃避光。
- 规格：
100ml
细胞凋亡检测
细胞凋亡检测用途
1. 用于肿瘤细胞和组织在内的不同种类病理标本研究；
2. 应用于临床诊疗，新药研制、生物制品开发、肿瘤放化疗、以及从促凋亡角度探索肿瘤的基因治疗；
3. 对相关疾病的早期发现、放化疗的疗效评价具有举足轻重的地位。
细胞凋亡检测方法
非常多样，根据具体情况可选用对应检测方法。以下每一种方法都有很详细的步骤说明，内容较多，此处就不一一列出，想了解详情，请点击「阅读原文」查看。
1. 荧光探针双标记法
2. 形态学检测法
3. DNA ladder 法
4. Annexin V/PI 双染色法
5. 磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin V 法）
6. TUNEL 法
7. Ca
spase-3 活性检测法
细胞增殖/毒性的注意事项
当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μl 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μl 培养基)。
酚红和血清对CCK8法的检测不会造成干扰，可以通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去。
CCK8可以检测大肠杆菌，但不能检测酵母细胞。在细胞增殖实验每次测定的过程中需要避免细菌污染，以免影响结果。
CCK-8在0-5℃下能够保存至少6个月，在-20℃下避光可以保存1年。
当在培养箱内培养时，培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发，由于体积不准确而增加误差。一般情况下，最外一圈的孔只加培养基，不作为测定孔用。
在培养基中加入CCK8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验时，还应考虑药物的吸收，可在加入药物的培养基中加入CCK8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度作为空白对照。
金属对CCK-8显色有影响：当终浓度为1 mM的氯化亚铅、硫酸铜会抑制5%、15%、90%的显色反应，使灵敏度降级。如果终浓度是10 mM的话，将会100%抑制。
悬浮细胞由于染色比较困难，一般需要增加细胞数量和延长培养时间。
细胞周期检测
细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。细胞周期是一个重要的检测参数，研究细胞周期变化的影响对于肿瘤的发展及药物研发有着重要的作用。例如，已知抑制有丝分裂的化合物大都用来减缓肿瘤细胞的生长。
测定原理：
① 待测细胞经 3H- 胸腺嘧啶核苷标记后，所有 S 期细胞均被标记。
② S 期细胞经 G2 期才进入 M 期，所以一段时间内 PLM = 0。
③ 开始出现标记 M 期细胞时，表示处于 S 期最后阶段的细胞，已渡过 G2 期，所以从 PLM = 0 到出现 PLM 的时间间隔为 G2期的持续时间。
④ S 期细胞逐渐进入 M 期，PLM 上升，到达到最高点的时候说明来自处于 S 最后阶段的细胞，已完成 M，进入 G1 期。所以从开始出现 M 到 PLM 达到最高点 (≈ 100%) 的时间间隔就是 M 期的持续时间。
⑤ 当 PLM 开始下降时，表明处于 S 期最初阶段的细胞也已进入 M 期，所以出现 LM 到 PLM 又开始下降的一段时间等于 S 期的持续时间。
细胞染色
常用的细胞染色方法有：
1、简单染色法，常用碱性染料如美蓝等进行简单染色；
2、革兰氏染色法，主要包括结晶紫初染、碘液媒染、乙醇脱色以及番红复染四个过程；
3、瑞氏染色法，瑞氏染料溶剂主要是由伊红美蓝组成；
4、吉姆萨染色法，吉姆萨染色原理与结果和瑞特染色法基本相同；
5、细胞免疫荧光染色法，免疫荧光染色的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合。
蛋白提取/检测
操作过程中
z 操作时总是小体积小量的操作，避免污染，并且动作要快
a：此类蛋白酶在活性中心包含丝氨酸和组氨酸。
b：此类蛋白酶在活性中心包含半胱氨酸（巯基，-SH - ）。
c：此类蛋白酶在活性中心包含金属离子（如：Zn 2+ ，Ca 2+ ，Mn 2+ ）。
d：此类蛋白酶在活性中心包含天冬氨酸族。
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文献和实验胰酶使用注意：1、在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。2、胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差。贴壁细胞的消化：1、吸去培养液，用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清2、加入少量胰酶细胞消化液，略盖过细胞即可，根据胰酶效率差异可以增加惑减少胰酶用量。室温放置30秒至2分钟（不同的细胞消化时间有所不同）3、显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化呈白茫状；或者用枪吹打
易造成细胞膜损伤而出现细胞坏死的假阳性，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-荧光素的结合从而干扰对于细胞凋亡的检测。同时，胰酶细胞消化液中应尽量不含EDTA，因为EDTA可能会影响Annexin V与磷脂酰丝氨酸的结合。 加入步骤1中收集的细胞培养液，将细胞轻轻吹打下来，转移到离心管内，300 g离心5 min，弃上清，收集细胞，用PBS洗涤细胞一次，轻轻悬浮细胞并计数。 注意：加入细胞培养液非常重要，一方面可以收集已经悬浮的发生凋亡或坏死的细胞，另一方面细胞培养液中的血清
温和，对细胞损伤较小，但是，价格也较贵。中止同样是用血清。 二、离子螯合剂：不破坏细胞表面分子 ，仅与CAMs螯合，因此，如果检测细胞表面分子的话，尽量，甚至是一定不要用酶消化法。 1、EDTA 。用得也是非常多。一般浓度在0.02%左右。作用于细胞与间质，对细胞间也有一定作用。注意，它能显著影响pH值，而且在弱碱性条件下才易溶。因此，配制时应调节好酸碱度。它不能被终和。因此，消化下来的细胞要洗一遍。 2、商品化的无酶消化液。个人的使用经常觉得对细胞的损伤
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