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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
38
- 英文名:
详见说明书
- CAS号:
详见说明书
- 保质期:
一年
- 供应商:
上海一研
- 保存条件:
4°C保存
- 规格:
100T/盒
5×Equilibration Buffer————750μl
FITC-12-dUTP Labeling Mix———100 μl
Recombinant TdT Enzyme—————20 μl
Proteinase K (2 mg/ml)————40 μl
DNase I (1 U/μl)———————5μl
10×DNase I Buffer——————100 μl
参数规格:
产品名称 RECK mRNA原位杂交试剂盒
规格:100T/盒
特异性: 人
标记方式: 3’—尾段标记
保存条件: 4°C保存一年
试剂盒内容:
1.RECK寡核苷酸探针杂交液 2ml;
2.预杂交液 2ml;
3.胃蛋白酶(×10;Pepsin) 2ml;
4.封闭液 5ml;
5.生物素化鼠抗 5ml;
6.SABC-POD 5ml;
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
操作程序:
注意:最重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
产品具有以下优点:
1、原装进口抗体----高效、灵敏、特异
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6、适用于体液、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种类型的样本
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8、可检测指标齐全:炎症因子、血管生成素、动脉粥样硬化因子、趋化因子、生长因子基质金属蛋白酶、脂肪因子等等
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ALDH1A1 Polyclonal Antibody斑马鱼细胞英文名称: ALDH1A1 Polyclonal Antibody细胞冻存步骤:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例; 1.细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入2ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。 2.1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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CETP Polyclonal Antibody小鼠精母细胞英文名称: CETP Polyclonal Antibody组织来源:小鼠,BALB/c品系
CASK Polyclonal Antibody家猫皮肤成纤维细胞英文名称: CASK Polyclonal Antibody细胞污染:HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌检测阴性。
FH Polyclonal Antibody狗肺成纤维细胞宿主: Rabbit细胞污染:HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌检测阴性。
STAT5B Polyclonal Antibody袋鼠肾细胞英文名称: STAT5B Polyclonal Antibody细胞污染:HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌检测阴性。
DPYD Polyclonal AntibodyMEF抗性的小鼠胚胎成纤维细胞,经射线处理,P3,300万细胞英文名称: DPYD Polyclonal Antibody组织来源:小鼠,neo转基因小鼠,C57品系 取孕12.5天的neo转基因C57小鼠的胚胎制备后经过射线处理
S100A16 Polyclonal Antibody昆明白小鼠胚胎成纤维细胞,经射线处理,P3,100万细胞英文名称: S100A16 Polyclonal Antibody组织来源:小鼠,昆明白品系 取孕12.5天的昆明白小鼠的胚胎制备后经过射线处理
UBE2J2 Polyclonal Antibody小鼠胚胎成纤维细胞,经射线处理,P3,300万细胞英文名称: UBE2J2 Polyclonal Antibody组织来源:小鼠,ICR品系 取孕12.5天的ICR小鼠的胚胎制备后经过射线处理
RAB17 Polyclonal Antibody家猫肺成纤维细胞英文名称: RAB17 Polyclonal Antibody细胞污染:HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌检测阴性。
RECK mRNA原位杂交试剂盒菌株类型:E.coli
培养基:LB培养基
生长条件:37 ℃, 有氧
基因型:F- ompT hsdSB(rB-, mB-) gal dcm endA1 lon- proUp::T7 RNAP::malQ-lacZ (TetS)
抗性:四环素敏感
质粒转化条件:42 ℃ 热激
应用:蛋白表达
诱导方法:IPTG
菌株特点:
BL21SI是 lon和ompT蛋白酶缺陷型型菌株。
BL21-SI感受态细胞是用于蛋白质表达的宿主菌株。
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文献和实验原位杂交法测定TNF的mRNA 原位杂交 【试剂及配制】 (1) TNF-DNA探针 (2) 地高辛标记液试剂盒 (3) 杂交液:60%去离子甲酰胺,300mmol/L NaCl、30mmol/L柠檬酸钠、10mmol/L EDTA 25mmol/L NaH2 PO4 (pH7.4),5%葡聚糖硫酸酯,250μg/μl变性鲑精DNA (4) 设备:温箱,水浴
试剂盒 公司 型号 次数 价格 推荐指数 mRNA提取 生工 SK1411 10次 750 SK1412 20次 1100 mRNA提取 invi K1580-96 TAKARA 23006 6 rxns 7059 mTRAPTMMaxi 23506 5 x 6 rxns 30019
相机拍照时,上色的 RNA 胶要尽可能少接触紫外光,若接触太多或白炽灯下暴露过久,会使 RNA 信号降低。从琼脂糖凝胶中分离功能完整的 mRNA 时,甲基氢氧化汞是一种强力、可逆变性剂,但是有毒,因而许多人喜用甲醛作为变性剂。所有操作均应避免 RNase 的污染。5. 组织原位杂交(Tissue in situ hybridization)简称原位杂交,指组织或细胞的原位杂交,它与菌落的原位杂交不同,菌落原位杂交需裂解细菌释出 DNA,然后进行杂交。而原位杂交是经适当处理后,使细胞通透性增加
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