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细胞系作为正常或肿瘤组织的模式细胞被广泛应用于科学研究和药物开发,然而很大一部分的细胞系被错误标记或被其它个体、组织、种系来源的细胞所替代 。
细胞系错误鉴定问题已有50年历史,基于国际细胞库的分析数据显示:1984年细胞错误鉴定率为35%,1999年为18%,直到最近几年,应用于生物医学领域的细胞系需要鉴定的问题仍然很少有人关注。
细胞系STR鉴定错误鉴定所造成的后果
l 细胞系的损失
l 时间和金钱的损失
l 在公众领域(文献,专利等)提供错误信息
l 造成实验结果不一致或不可重复
l 个人:尴尬;公众:羞辱
细胞系鉴定与STR的关系
STR(Short TandemRepeat,短串联重复序列)基因分型已被ICLAC、ATCC等权威机构作为金标准应用于细胞鉴定 。
STR基因位点由长度为3~7个碱基对的短串连重复序列组成, 这些重复序列广泛存在于人类基因组中,可作为高度多态性标记,被称为细胞的DNA指纹。STR 基因座位上的等位基因可通过扩增区域内重复序列的拷贝数的不同来区分,在毛细管电泳分离之后可通过荧光检测来识别。随后通过一定的计算方法,即可根据所得的STR分型结果与细胞STR数据库比对从而推算出样品所属的细胞系或可能的交叉污染的细胞系名称。
南京赛泓瑞生物细胞系鉴定服务
| 人源细胞STR位点信息 | |||
| TH01 | AMEL | TPOX | D3S1358 |
| D12S391 | D5S818 | VWA | D13S317 |
| D7S820 | D2S1338 | D8S1179 | D6S1043 |
| CSF1PO | D21S11 | D19S433 | D16S539 |
| FGA | D18S51 | PENTAD | PENTAE |
南京赛泓瑞生物为了进一步提高鉴定的分辨率,除了包含ATCC检测的8个STR和1个性别决定位点Amelogenin外,另新增了11个高度多态性位点 ,共检测20个STR位点。
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文献和实验关于如何鉴定收到的新细胞是否有污染,很多站友,特别是新接触细胞培养的站友通常没有太多经验,在此我分享下我这边接收到新细胞后是如何判断是否有污染的。一、肉眼观察以下几项:1. 细胞瓶身:如果瓶身上没有裂缝,正常;如果瓶身上有裂缝,则污染几率非常大。2. 培养基颜色:如果培养基颜色是红色或者粉色,正常;如果是橙色,则可能是污染或者细胞过密;如果是黄色,则污染几率非常大。3. 培养基澄清度:如果培养基澄清,正常;如果有少许漂浮物,则可能是污染或者有细胞凋亡;如果培养基很浑浊,甚至出现絮状物,则污染
据统计约 30% 细胞系被交叉污染或错误辨识,因使用了交叉污染或错误辨识的细胞而导致研究结论错误、结果不可重复、临床细胞治疗灾难性后果……,这浪费大量时间、精力和金钱。Everything was going along fine until they discovered their HeLa cell line expressed Y chromosome markers因此近年 NIH、ATCC、Nature 和 Science 等对此多次发出呼吁,要求研究者对细胞进行鉴定。STR 基因
、 miRNA靶基因的验证与miRNA靶基因 的预测方法相比,对miRNA靶基因进行实验验证的方法并不多,目前还没有一个快速、简便、高通量的鉴定方法。最直接的鉴定方法是, 利用荧光定量PCR及Westernblot方法分别检测转染或敲低miRNA后细胞中mRNA水平及蛋白水平的变化,从而确定miRNA与靶基因的对应关系。这种方法能够直接鉴定出miRNA的靶基因, 准确度高但不能鉴定miRNA的靶位点。转染或敲低miRNA:方式主要有两种,一种是构建miRNA过表达载体的稳定表达系统,一种是人工合成miRNA
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