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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
56
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海博湖
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
瓶
产品参数:
| 产品名称 | 兔抗生物素-FITC |
| 英文名称 | |
| 货号 | BH-DB1201 |
储存条件: -20°C
保存: -20℃
单位: 瓶
备注:产品信息可能会有优化升级。请以实际标签信息为准。
注意事项:
1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同,应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。
2、虽然作用温和,但能硬化组织,固定时间过久会导致组织变脆,切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过 24 小时。
3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基,使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或 完全掩盖某些抗原决定簇,使之不能充分暴露,可造成假阴性的染色,影响免疫组化结果。因此,4%固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时,有时需要对抗原先进行修复,然后才能进行免疫染色等后续操作。
4、本产品对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作
操作步骤:
根据使用量,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。混匀备用(PMSF 现用现加)。
1、样品前处理:
a)对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/管,然后再裂解。
c)对于组织样品: 把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
2、后处理:
将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。
温馨提示:
工作液与浓缩液选择的技巧,以及各自的优势。
1,工作液的优势:工作液操作方便,降低实验操作步骤,对于要求无菌的实验,降低染菌风险。
2,浓缩液的优势:浓缩液成本相对较低,实验范围更广,对于不要求无菌的实验,可以进行多种浓度的实验分析以及比较。而且由于浓度高,保存更加稳定。
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文献和实验。 ④其他试剂和材料 l%叠氮化钠、离心机及离心管、烧杯(25m1)、搅拌器、无菌吸管及毛细滴管、烧杯(500m1)透析袋等。 (2)方法及步骤 ①取高效价的抗人球蛋白兔免疫血清,分离球蛋白,用盐水(0.15mol/LNaCl)及缓冲液(0.5mol/LNaHC03—Na2C03,pH9.0)稀释使每毫升内含蛋白质lOmg,缓冲液为总量的10%,降温至4℃。 ②加入异硫氰酸盐(FITC)荧光素[蛋白:荧光素=(50—80)mg‘lmg],在0~4~C下电磁搅拌12~
0.1ml 1%多聚甲醛,4℃ 15分钟。用冷PBS洗涤细胞2次,加入冷70%(v/v)乙醇溶液,轻轻悬浮细胞,-20℃固定细胞24小时。4℃离心500×g 10分钟,去上清液。 3.用PBS洗涤细胞2次。加入50μl TdT反应液悬浮细胞,37℃反应30分钟。用PBS洗涤细胞2次,悬浮于0.1ml PBS中。 4.加入10μl抗生物素蛋白-TC或抗生物素蛋白-FITC,室温反应30分钟,用PBS洗涤细胞。 5.上样于FACS仪,分析调亡细胞的类型和调亡情况。 三、7-AAD染色
分钟。用冷1% BSA-PBS洗涤细胞2次。置冰上,加入0.1ml 1%多聚甲醛,4℃ 15分钟。用冷PBS洗涤细胞2次,加入冷70%(v/v)乙醇溶液,轻轻悬浮细胞,-20℃固定细胞24小时。4℃离心500×g 10分钟,去上清液。 3.用PBS洗涤细胞2次。加入50μl TdT反应液悬浮细胞,37℃反应30分钟。用PBS洗涤细胞2次,悬浮于0.1ml PBS中。 4.加入10μl抗生物素蛋白-TC或抗生物素蛋白-FITC,室温反应30分钟,用PBS洗涤细胞。 5.上样
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