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详见说明书
- 供应商:
上海博湖
- 保存条件:
4℃或-20℃冻存
- 规格:
瓶
储存条件: 4℃或-20℃冻存
外观(性状): 溶剂为0.01mol/L pH7.2 PBS
| 产品名称 | 人IgM |
| 英文名称 | |
| 货号 | BH-DB1186 |
操作步骤:
Ⅰ 实体组织蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂, 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
2. 每100mg固体组织置于培养皿中,手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃匀浆器上下手动匀浆15次,注意低温操作;
3. 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管,离心10000转/分,4℃离心5 min;
4. 取上清转移至新的预冷的离心管中,即为全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
5. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
Ⅱ 培养细胞蛋白提取
1. 贴壁培养的细胞,吸去培养基后,加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次,每次振摇数次以尽量去除培养液;
2. 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞,将细胞及培养液移至离心管中, 1000转/分离心10 min,再用10mL/150mm培养板的冷PBS,1000转/分离心5 min洗两次;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂, 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
4. 细胞洗涤后,转至新的预冷的离心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:
| 细胞数量 | Lysis Buffer加入量 |
| 107个 | 0.5 mL~1 mL |
| 5×106个 | 0.2 mL~0.5 mL |
6. 14,000rpm,4℃离心15min,取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);
7. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
以下是人IgM的相关产品:
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CL-0453TE-10(
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RBE, 人肝胆管癌细
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SW480(人结肠癌细胞) 5×106cells/瓶×2壬苯醇(标准品)POLYETHYLENE GLYCOL MONO-4-NONYLPHENYL ETHER质量规格:含量测定
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小鼠促性腺激素释放激素elisa试剂盒 小鼠促性腺激素释放激素试剂盒 规格型号:96T/48T 小鼠促性腺激素释放激素试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:小鼠促性腺激素释放激素试剂盒、小鼠促性腺激素释放激素eisa试剂盒 保存条件:2-8℃ 保质期:6个月。 Epigoitrin 中文名:表告依春 分子式:C5H7NOS
小鼠促性腺激素释放激素(GH)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 Clerosterol glucoside 123621-00-1 中文名:赤桐甾醇葡萄糖苷 分子式:C35H58O6
人IgM3,3-Dimethoxy-5α-androstan-17-one 3591-19-3 中文名:3,3-二甲氧基-5α-雄烷-17-酮 分子式:C21H34O3 度:98.0% 小鼠甲状旁腺激素(PTH)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
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3-(tert-Butoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-4-phenyloxazolidine-5-carboxylic acid 143527-70-2 中文名: 分子式:C17H23NO5 度:98.0% 关键词: 小鼠甲基化酶(Methylase)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
3-(Hydroxymethyl)cyclopentanone 11
3-(Hydroxymethyl)cyclopentanol 1007125-14-5 中文名: 分子式:C6H12O2 度:% 关键词: 植物提取物; 天然产物; 天然产物库 小鼠基质细胞衍生因子-1α 英文名称: somal-derived factor-1 a 规格: 48T/96T 英文缩写: SDF-1α
固定液的应用:
1.单纯固定液(1)4%中性甲醛固定液:zui常用的固定液,能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是,中性甲醛是以pH7 2~7 4的磷酸缓冲液为溶剂配制的,其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封…
1.单纯固定液
(1)4%中性甲醛固定液:zui常用的固定液,能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是,中性甲醛是以 pH 7.2~7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的,其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处,保存时间不 超过一个月。
(2)乙醇固定液:使用时以80%~95%的浓度为宜,具有硬化、固定、脱水等作用,对组织渗透力较弱,因此很少单独使用,但其保存组织中的核酸强于中性甲醛,故常用于有核酸操作的实验或检查,如果用于证明尿酸结晶和保存糖原,可用100%乙醇固定组织。
(3)4%的多:主要用于培养细胞的固定。
2.混合固定液
(1)乙醇一甲醛(乙醇-福尔马林,AF)固定液:适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用,固定后的标本可直接入95%乙醇脱水。
(3)Bouin固定液:特别适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀,收缩很少,不会使组织变硬变脆。需现配现用。
(4)Carnoy固定液:穿透能力强,可很好的固定细胞质和细胞核,特别适合于固定外膜致密的组织,亦适用于糖原及尼氏小体的固定。
(5)Zenker固定液:经此液固定的标本,细胞核和细胞质染色颇为清晰,但成本较昂贵且需特殊处理汞。该固定液要避免接触阳光,以免引起化学变化而失效
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文献和实验未染色标准品,10 μL;(2) 大鼠肝裂解液,10 μg;(3) 溶菌酶,6 μg;(4) Bio-Rad® 宽范围标准品,1:50稀释;(5) BSA ,6 μg;(6) MagicMark™ XP标准品;10 μL;(7)人IgG,6 μg;(8)人IgM,6 μg;(9)大肠杆菌裂解液,10 μg;(10) Novex® Sharp未染色标准品,10 μL。 误区:NuPAGE® 凝胶跑得太慢了 事实
3.异种动物 例如用人IgM作为Ab1免疫小鼠制备单克隆Ab2。由异种动物免疫制备的Ab2血清中,除抗Id外还含有抗同种型的抗体。 (三)抗独特型抗体的检测 抗Id抗体的鉴定至关重要。通常采用免疫学检测方法如ELISA、RIA、免疫荧光和中和试验等,可根据具体条件和需要加以选用。抗Id的鉴定必须设置充分的对照,确保检测结果的可靠性。例如,在鉴定小鼠源性抗原特异性人IgM抗独特型抗体时,用正常人IgM作为对照。将Ab1(抗原特异性人IgM)包被微孔板,然后加检测样品(小鼠源性抗Id
到固相上。因此如用抗人IgM作为二抗,间接测定IgM抗体,必须先将标本用A蛋白或抗IgG抗体处理,以除去IgG的干扰。在临床检验中测定抗体IgM时多采用捕获包被法。先用抗人IgM抗体包被固相,以捕获血清标本中的IgM(其中包括针对抗原的特异性IgM抗体和非特异性的IgM)。然后加入抗原,此抗原仅与特异性IgM相结合。继而加酶标记针对抗原的特异性抗体。再与底物作用,呈色即与标本中的IgM成正相关。此法常用于病毒性感染的早期诊断。甲型肝炎病毒(HAV)抗体的检测模式。类风湿因子(RF)同样能干扰捕获包被
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